[發(fā)明專利]β人絨毛膜促性腺激素磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210473592.X
• 申請日: 2012-11-20
• 公開（公告）號: CN102998467A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉萍;張影;宋啟超;范利花
• 申請（專利權(quán)）人: 博奧賽斯（天津）生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/76
• 分類號: G01N33/76
• 代理公司: 天津?yàn)I海科緯知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12211
• 代理人: 李莉華

1.β人絨毛膜促性腺激素磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

1）β-hCG校準(zhǔn)品；

2）偶聯(lián)有鏈霉親和素的磁微粒懸浮液；

3）生物素標(biāo)記的β-hCG抗體；

4）β-hCG抗體酶結(jié)合物，所用的酶為辣根過氧化物酶，辣根過氧化物酶純度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；

5）β-hCG質(zhì)控品；

6）化學(xué)發(fā)光液A液和B液；

7）20倍濃縮洗液；

8）反應(yīng)管。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的β人絨毛膜促性腺激素磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述的發(fā)光液A液的主要成分為魯米諾，B液的主要成分是過氧化脲。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的β人絨毛膜促性腺激素磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述的磁微粒是表面包裹帶有氨基或羧基活性基團(tuán)的四氧化三鐵，粒徑1～2um。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的β人絨毛膜促性腺激素磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述的β-hCG質(zhì)控品包括低值質(zhì)控品和高值質(zhì)控品。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的β人絨毛膜促性腺激素磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述的反應(yīng)管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。

6.一種制備所述權(quán)利要求1的試劑盒的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）β-hCG校準(zhǔn)品的配制：

將β-hCG純品用含50%牛血清的校準(zhǔn)品稀釋液配制成校準(zhǔn)品濃儲液，以企業(yè)校準(zhǔn)品進(jìn)行定標(biāo)，用校準(zhǔn)品稀釋液稀釋至工作濃度，分別為0，5，25，100，250，1000mIU/mL；

（2）β-hCG質(zhì)控品的配制：

將β-hCG抗原用含有50%牛血清的校準(zhǔn)品稀釋液稀釋配成濃儲液，以企業(yè)校準(zhǔn)品對其定值后，用校準(zhǔn)品稀釋液分別稀釋至8～12mIU/mL和400～600mIU/mL；

（3）磁性顆粒-鏈霉親和素懸浮液的制備：

取100mL0.1mol/L?2-嗎啉乙磺酸溶液，依次加入10mg磁性顆粒和3mg鏈酶親和素，攪拌30min，然后加入10mg/mL碳二亞胺鹽酸鹽溶液3.5uL，反應(yīng)1h后，使用磁力架吸附，靜止10min，移去液體，加入10mL?0.01mol/L?PBS，重復(fù)上述過程，共洗滌3次，最后用0.01mol/L?PBS定溶至1L即可；

（4）生物素標(biāo)記的β-hCG抗體的制備

取0.5mgβ-hCG抗體，用硼酸鹽緩沖液在2～8℃下透析1～3h；將透析后的抗體加入25ug生物素，同時加入二甲基亞砜，最終濃度為10%，避光反應(yīng)3h，緩慢振蕩；在上述溶液中加入250uL1mol/L氯化銨溶液，常溫避光反應(yīng)30～60min；用0.01mol/L?PBS溶液在2～8℃下透析2天，期間換液3～5次；

（5）β-hCG抗體酶結(jié)合物的制備

采用高碘酸鈉氧化法將β-hCG抗體與辣根過氧化物酶進(jìn)行偶聯(lián)后，用酶稀釋液將其稀釋至工作濃度1:4000，并加入5-20%酶穩(wěn)定劑，儲存于2~8℃；

（6）20倍濃縮洗液的配制

20濃縮洗液包括58gL磷酸氫二鈉，5.92g/L磷酸二氫鈉，180g/L?NaCl，10mL/LTween-20和1‰Proclin300；

（7）化學(xué)發(fā)光液A液和B液的配制

A液為0.7g/L魯米諾，0.165g/L對碘酚，緩沖液為pH8.6的5mmol/L?Tris·HCl，避光保存；B液為0.675g/L過氧化脲，用工藝用水配制；A液和B液在使用前5min混合；

（8）組裝：將上述試劑組裝成盒，儲存于2~8℃；

（9）對采用該方法制的試劑盒的進(jìn)行物理檢查，準(zhǔn)確度、劑量-反應(yīng)曲線的線性、精密度、特異性、靈敏度、質(zhì)控品的測定值和穩(wěn)定性進(jìn)行測定。