[發(fā)明專利]血管緊張素Ⅰ磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210472475.1
• 申請(qǐng)日: 2012-11-20
• 公開（公告）號(hào): CN102998465A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉萍;張影;宋啟超;范利花
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 博奧賽斯（天津）生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/74
• 分類號(hào): G01N33/74;G01N33/531;G01N33/532;G01N21/76
• 代理公司: 天津?yàn)I?？凭曋R(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12211
• 代理人: 李莉華

1.血管緊張素Ⅰ磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

1）Ang?Ⅰ校準(zhǔn)品，Ang?Ⅰ校準(zhǔn)品梯度濃度分別為0，0.8，2，10，20，50ng/mL，校準(zhǔn)品稀釋液是50%牛血清；

2）偶聯(lián)有鏈霉親和素的磁微粒懸浮液；

3）生物素標(biāo)記的Ang?Ⅰ抗體；

4）Ang?Ⅰ抗體酶結(jié)合物，所用的酶為辣根過(guò)氧化物酶，辣根過(guò)氧化物酶純度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；

5）Ang?Ⅰ質(zhì)控品；

7）20倍濃縮洗液；

8）反應(yīng)管。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血管緊張素Ⅰ磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的發(fā)光液A液的主要成分為魯米諾，B液的主要成分是過(guò)氧化脲。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血管緊張素Ⅰ磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的磁微粒是表面包裹帶有氨基或羧基活性基團(tuán)的四氧化三鐵，粒徑1-2um。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血管緊張素Ⅰ磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的Ang?Ⅰ質(zhì)控品包括低值質(zhì)控品和高值質(zhì)控品，低值質(zhì)控品和高值質(zhì)控品的允許范圍分別為4.16～6.24ng/mL和11.6～17.4ng/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血管緊張素Ⅰ磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的反應(yīng)管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。

6.一種制備所述權(quán)利要求1的試劑盒的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）Ang?Ⅰ校準(zhǔn)品的配制：

將Ang?Ⅰ純品用50%牛血清稀釋成系列梯度，濃度分別為0，0.8，2，10，20，50ng/mL；

（2）Ang?Ⅰ質(zhì)控品的配制：

將Ang?Ⅰ抗原用含有50%牛血清配制低值質(zhì)控品和高值質(zhì)控品，低值質(zhì)控品和高值質(zhì)控品允許范圍分別為4.16～6.24ng/mL和11.6～17.4ng/mL；

（3）磁性顆粒-鏈霉親和素懸浮液的制備：

取100mL0.1mol/L?2-嗎啉乙磺酸溶液，依次加入10mg磁性顆粒和3mg鏈酶親和素，攪拌30min，然后加入10mg/mL碳二亞胺鹽酸鹽溶液3.5uL，反應(yīng)1h后，使用磁力架吸附，靜止10min，移去液體，加入10mL?0.01mol/L?PBS，重復(fù)上述過(guò)程，共洗滌3次，最后用0.01mol/L?PBS定溶至1L即可；

（4）生物素標(biāo)記的Ang?Ⅰ抗體的制備

取0.5mg?Ang?Ⅰ抗體，用硼酸鹽緩沖液在2～8℃下透析1～3h；將透析后的抗體加入25ug生物素，同時(shí)加入二甲基亞砜，最終濃度為10%，避光反應(yīng)3h，緩慢振蕩；在上述溶液中加入250uL1mol/L氯化銨溶液，常溫避光反應(yīng)30～60min；用0.01mol/L?PBS溶液在2～8℃下透析2天，期間換液3～5次；

（5）Ang?Ⅰ酶結(jié)合物的制備

采用高碘酸鈉氧化法將Ang?Ⅰ與辣根過(guò)氧化物酶進(jìn)行偶聯(lián)后，用酶稀釋液將其稀釋至工作濃度1:8000，并加入5-20%酶穩(wěn)定劑，儲(chǔ)存于2~8℃；

（6）20倍濃縮洗液的配制

20濃縮洗液包括58g/L磷酸氫二鈉，5.92g/L磷酸二氫鈉，180g/L?NaCl，10mL/LTween-20和1‰Proclin300；

（7）化學(xué)發(fā)光液A液和B液的配制

A液為0.7g/L魯米諾，0.165g/L對(duì)碘酚，緩沖液為pH8.6的5mmol/L?Tris·HCl，避光保存；B液為0.675g/L過(guò)氧化脲，用工藝用水配制；A液和B液在使用前5min混合；

（8）組裝：將上述試劑組裝成盒，儲(chǔ)存于2~8℃；

（9）對(duì)采用該方法制的的試劑盒的進(jìn)行物理檢查，準(zhǔn)確度、劑量-反應(yīng)曲線的線性、精密度、特異性、靈敏度、質(zhì)控品的測(cè)定值和穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)定。