[發明專利]乳及蛋白飲品中小麥球蛋白快速定性檢測試劑及制備方法有效

申請號：	201210472183.8	申請日：	2012-11-19
公開（公告）號：	CN102998461A	公開（公告）日：	2013-03-27
發明（設計）人：	肖海龍;屠海云	申請（專利權）人：	杭州市質量技術監督檢測院
主分類號：	G01N33/68	分類號：	G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;C07K16/16
代理公司：	杭州九洲專利事務所有限公司 33101	代理人：	王洪新
地址：	310019 浙***	國省代碼：	浙江;33
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摘要：
搜索關鍵詞：	蛋白飲品小麥球蛋白快速定性檢測試劑制備方法
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種檢測小麥球蛋白的高靈敏ELISA試劑及制備方法，可應用于牛奶中小麥蛋白摻偽快速篩查檢測，以及蛋白飲品中小麥球蛋白過敏原的快速定性檢測。

背景技術

不同來源的蛋白質的營養價值有別，一般來說，牛奶中蛋白質含有人體生長發育的一切必需的氨基酸，消化率可達98%～100%，為完全蛋白質，因而具有較高的營養價值，植物蛋白白中缺少必需氨基酸，且在人體消化吸收和利用程度也較差，因而營養價值相對較低。根據其不同的溶解性，可將小麥中的蛋白質分為清蛋白(溶于水和稀的緩沖液)、球蛋白(溶于鹽溶液)、麥谷蛋白(溶于稀酸和稀堿溶液)和醇溶蛋白(溶于70%～90%乙醇)，后兩種蛋白主要影響面粉面筋性能。由于生產來源及加工工藝的因素，市場上動物奶蛋白價格遠高于植物蛋白。在利潤的驅使下，采用植物蛋白代替動物蛋白、在乳品及含蛋白飲料中摻假的情況時有發生；曾有過牛奶中摻小麥粉的報道，也存在摻小麥蛋白的可能性。這種摻假盡管質量安全危害性較低，但降低了乳品應有的價值，具有欺騙消費者、擾亂市場秩序的惡果。為確保產品的真實性，有必要建立快速檢測小麥球蛋白的方法。

另據報道，國外約有30%的人群對特定食物有過敏反應，我國一項針對15～24歲健康人群的調查顯示，在15～24歲年齡段健康人群中，約有6%的人曾患有食物過敏。估計20%～65%的過敏性腸道綜合征和消化不良患者的病因與食物過敏有關。小麥被認為是一種主要的食物過敏原，它是FAO(1995)報告的八類常見過敏食物之一。雖然目前全世界缺乏有關小麥過敏的發病率統計數據，但小麥過敏仍然是一個不可忽視的食品安全問題，小麥球蛋白是小麥蛋白成分中的主要過敏原之一。對于食物過敏，目前還沒有有效的治療手段，患者只能通過嚴格避免過敏源來避免癥狀的發生。因此，食品中過敏原的檢測也就成為食源性過敏控制的主要手段。

目前關于乳及蛋白飲品中小麥球蛋白的快速定性方法鮮見報道，針對蛋白成分檢測技術主要有SDS-PAGE、PCR、液相色譜和質譜等；上述技術僅適合應用于實驗室分析，不適合于普通消費者使用。由于乳及蛋白飲品消費群體廣，有必要建立一種簡便、快速、經濟、高靈敏的定性檢測試劑，供廣大消費者自行使用。

發明內容

本發明的目的是針對以上背景和技術需求，提供一種酶聯免疫吸附試劑（ELISA）以及制備方法，用于乳及蛋白飲品中小麥球蛋白的快速定性檢測；所述試劑及方法應具有操作簡便、快速、結果直觀、高靈敏的特點。

為了達到上述目的，本發明人進行了廣泛深入的研究，通過提取、純化麥胚粉中小麥球蛋白，制備小麥球蛋白的單克隆抗體和多克隆抗體，獲得了采用單克隆抗體捕獲目標、多克隆抗體檢測的雙抗夾心法所需的檢測試劑，從而完成本發明。

本發明提供的技術方案是：乳及蛋白飲品中小麥球蛋白快速定性檢測試劑，包括以下分別封裝的組分及含量：

鼠抗小麥球蛋白單克隆抗體80-120ng/ml，其余是緩沖液；

兔抗小麥球蛋白酶聯多克隆抗體70-90ng/ml，其余是緩沖液；

底物顯色劑A液：醋酸鈉26-28g/l，檸檬酸3-3.5g/l，30%雙氧水0.5-0.7ml/l，其余為蒸餾水；

底物顯色劑B液：乙二胺四乙酸二鈉0.3-0.5g/l，檸檬酸1.8-2.0g/l，甘油0.09-0.11l/l，TMB?0.28-0.32g/l，DMSO?5-7ml/l，其余為蒸餾水；

終止液：1.8-2.2mol/L硫酸溶液。

所述乳及蛋白飲品中小麥球蛋白快速定性檢測試劑，包括以下分別封裝的組分及含量：

鼠抗小麥球蛋白單克隆抗體100ng/ml，其余是緩沖液；