[發(fā)明專利]基于HepG2 HBV rtS202G ETV耐藥變異株細(xì)胞系及其建立方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210469842.2
• 申請(qǐng)日: 2012-11-18
• 公開（公告）號(hào): CN103820392A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張軼俊;張繼明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/79;C12Q1/02;C12Q1/70;C12R1/91
• 代理公司: 上海元一成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.基于HepG2?HBV?rtS202G?ETV耐藥變異株細(xì)胞系，其特征在于，該細(xì)胞株保藏登記編號(hào)為CGMCC?No.6393，命名為HepG2.HS202G。

2.按權(quán)利要求1所述的基于HepG2?HBV?rtS202G?ETV耐藥變異株細(xì)胞系，其特征在于，所述的HepG2.HS202G細(xì)胞株穩(wěn)定傳代20余代，穩(wěn)定表達(dá)病毒顆粒以及HBsAg以及HBeAg病毒蛋白，其HBsAg200IU/ml，HBeAg200S/CO，較HepG2.2.15高5-10倍，上清HBV-DNA10⁴-10⁵。

3.按權(quán)利要求1所述的基于HepG2?HBV?rtS202G?ETV耐藥變異株細(xì)胞系，其特征在于，所述的HepG2.HS202G細(xì)胞株存在細(xì)胞內(nèi)HBV復(fù)制。

4.權(quán)利要求1的基于HepG2?HBV?rtS202G?ETV耐藥變異株細(xì)胞系的構(gòu)建方法，其特征在于，其包括：

采用HBV真核表達(dá)質(zhì)粒pREP-HBV-YVDD，其載體骨架為pREP10載體，HBV復(fù)制子為含cp啟動(dòng)子以及完整HBV前基因組的HBV1.2倍體，并定點(diǎn)誘變?yōu)槎魈婵f耐藥基因型S202G后插入切除RSV啟動(dòng)子的pREP10構(gòu)建成HBV真核表達(dá)質(zhì)粒pREP-HBV-S202G；將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后通過潮霉素篩選后檢測(cè)細(xì)胞中HBV復(fù)制、特異性抗原的表達(dá)及病毒顆粒的產(chǎn)生，并與HepG2.2.15細(xì)胞株比較后，確立耐藥HBV細(xì)胞克隆株HepG2.HS202G的建立。

5.權(quán)利要求1的基于HepG2?HBV?rtS202G?ETV耐藥變異株細(xì)胞系在制備篩選抗藥物、研究HBV生物學(xué)特點(diǎn)及其與細(xì)胞間相互作用的HBV細(xì)胞模型中的用途。