[發明專利]一種小單孢菌及利用該菌制備多種抗生素的方法

有效

• 申請號: 201210467946.X
• 申請日: 2012-11-16
• 公開（公告）號: CN102978133A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發明（設計）人: 張長生;張文軍;李蘇梅;張海波;張改云;張光濤;朱義廣
• 申請（專利權）人: 中國科學院南海海洋研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/62;C12P17/02;C12P15/00;C12P17/12;C12R1/29
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

1.小單孢菌（Micromonospora?rosaria）SCSIO?N160，其保藏編號為：CCTCC?NO:M?2012392。

2.一種制備抗生素rosamicin，6108B，M4365-A1，M4365-G1，fluostatinC，fluostatin?D，fluostatin?E，fluostatin?F，fluostatin?I，fluostatin?J，fluostatin?K，rabelomycin和phenanthroviridone的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（a）制備權利要求1所述的小單孢菌（Micromonospora?rosaria）SCSIO?N160的發酵培養物，將該發酵培養物的發酵液和菌絲體分開，發酵液經丁酮萃取，丁酮萃取層經過蒸餾濃縮后得到浸膏A；菌絲體先用丙酮浸提，浸提液回收丙酮后剩余的水相混合液用丁酮萃取，丁酮萃取層經過蒸餾濃縮后得到浸膏B；將浸膏A與B合并為浸膏C；

（b）浸膏C經硅膠柱層析，以體積比從100:0~0:100的氯仿-甲醇作為流動相梯度洗脫，氯仿-甲醇體積比為98:2梯度下洗脫下來的餾分Fr1，氯仿-甲醇體積比為95:5梯度下洗脫下來的餾分Fr.2，氯仿-甲醇體積比為90:10梯度下洗脫下來的餾分Fr.3，氯仿-甲醇體積比為50:50梯度下洗脫下來的餾分Fr.4；

餾分Fr.2經凝膠柱層析，用體積比為1:1的氯仿-甲醇作為流動相洗脫，得到餾分Fr.2-A至Fr.2-H，將餾分Fr.2-C經中壓反相層析，以體積比從100:0~0:100的甲醇：水線性梯度洗脫，收集體積比甲醇：水=35：65的餾分得化合物rosamicin，將餾份Fr.2-D上中壓反相柱，以體積比從100:0~0:100的甲醇：水線性梯度洗脫，收集體積比甲醇：水=40：60的餾分得化合物6108B，將餾份Fr.2-E用高壓液相制備，流動相為體積比水：乙腈=70:30，純化得到化合物M4365-A1，將餾分Fr.2-F用高壓液相制備，流動相為體積比乙腈：水=72:28，純化得化合物M4365-G1；

餾分Fr.1經凝膠柱層析，用體積比為1:1的氯仿-甲醇作為流動相洗脫，得到餾分Fr1-A，Fr1-B，Fr1-C，Fr1-D，Fr1-A經中壓反相層析，用體積比100:0~0:100的甲醇：水線性梯度洗脫，收集體積比甲醇：水=58：42的餾分得化合物fluostatin?I，收集體積比甲醇：水=50：50的餾分得Fr1-A-2，Fr1-A-2用高壓液相制備，用體積比乙腈：水=80：20為流動相洗脫，純化得化合物fluostatin?C和化合物fluostatin?E；Fr1-B用高壓液相制備，用體積比乙腈：水=65:35為流動相，純化得化合物fluostatin?F和化合物rabelomycin；Fr1-C用硅膠柱層析，以體積比100:0~0:100的氯仿-甲醇作為流動相梯度洗脫，收集體積比氯仿：甲醇=60：40的餾分得Fr1-C-(3)，Fr1-C-(3)通過PTLC層析，以氯仿：丙酮體積比為65:35為展開劑展開，收集比移值為0.8的餾分，得化合物fluostatin?D；Fr1-D以凝膠柱層析，用氯仿：甲醇體積比5:5洗脫，再用高壓液相制備，用體積比乙腈：水=60:40為流動相，純化得化合物fluostatin?K、化合物fluostatin?J和化合物phenanthroviridone。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的制備小單孢菌（Micromonospora?rosaria）SCSIO?N160的發酵培養物是通過以下方法制備：將活化的小單孢菌SCSIO?N160接入種子培養基中，28℃，200rpm，培養144h制得種子液，將種子液以10%的接種量接入到發酵培養基中，28℃，200rpm，振蕩培養120h，而制得發酵培養物，所述的種子培養基和發酵培養基的配方都為每升培養基中含有：淀粉10g，葡萄糖20g，酵母粉10g，玉米粉3g，牛肉膏3g，MgSO₄·7H₂O?0.5g，K₂HPO₄0.5g，CaCO₃2g，粗海鹽30g，余量為水，pH?7.2。

4.權利要求1所述的小單孢菌（Micromonospora?rosaria）SCSIO?N160在制備抗生素rosamicin、6108B、M4365-A1、M4365-G1、fluostatinC、fluostatin?D、fluostatin?E、fluostatin?F、fluostatinI、fluostatin?J、fluostatin?K、rabelomycin或phenanthroviridone中的應用。