[發明專利]一種隨機shRNA文庫的構建方法無效

申請號：	201210464692.6	申請日：	2012-11-19
公開（公告）號：	CN102925987A	公開（公告）日：	2013-02-13
發明（設計）人：	楊國棟;袁麗君;王臻	申請（專利權）人：	楊國棟;袁麗君;王臻
主分類號：	C40B50/06	分類號：	C40B50/06;C40B40/02;C12N15/85
代理公司：	暫無信息	代理人：	暫無信息
地址：	710032 陜西省西***	國省代碼：	陜西;61
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種隨機 shrna 文庫構建方法
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【權利要求書】：

1.一種隨機shRNA文庫的構建方法，其特征在于：通過合成特征性核酸序列(自5’到3’依次為21任意核酸、由Xho1酶切位點形成互補鏈的小莖環結構)，通過聚合、連接反應形成含有酶切位點和完全隨機的shRNA的雙鏈DNA結構，克隆至T載體，再用Xho1酶切后自連的方法，去除shRNA內部額外的序列，最后通過Age1和EcoR1酶切回收T載體中插入片段，亞克隆至pLKO.1載體中，構建表達完全隨機的shRNA的pLKO.1質粒文庫。

2.按照權利1表述的、合成的特征性核酸序列中的小莖環結構，其特征是：5TCGAGATCACCATTATAAGATCTCGAG-3’。

3.按照權利1表述的Linker序列，其特征分別是：連接子1序列：

5’-TTTTTAAGCTTCTCAGCAGAGAACTCA-3’；連接子2序列：

5’-ACCGGTCCACCAACTATCCAGAC-3’。

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