[發明專利]一種制備高活性低毒副作用肝素的方法

無效

• 申請號: 201210464124.6
• 申請日: 2012-11-19
• 公開（公告）號: CN102911981A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 陳敬華;劉衛超;周斌;王敏;程詠梅;滕麗萍;陳荊曉
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種制備高抗凝活性低毒副作用肝素的方法，是以肝素為底物，采用3’-磷酸腺苷-5’-磷酸硫酸(PAPS)再生系統，以肝素生物合成酶3-O-硫酸基轉移酶對其進行選擇性修飾，再以2-O-脫硫酸基酶對2-O-位硫酸基脫硫酸化，增加抗凝活性中心的數量并降低其電荷密度，得到高抗凝活性低毒副作用肝素。

2.根據權利要求1所述方法，其特點在于：所述PAPS再生系統中，反應液為含1％Triton?X-100，1％BSA，1mM?MgCI₂，1mM?MnCI₂，pH為5.0-8.0的50mM?Tris-HCI緩沖液，PNPS的濃度為0.1-10mM，PAP的濃度為0.1-50Um，AST-IV的用量為0.1-50mg/ml；優選5-10mg/ml；所述方法中，肝素生物合成酶3-O-硫酸基轉移酶的用量為0.1-50mg/mg底物，優選1-20mg/ml底物，反應溫度為10-40℃，優選30-40℃，酶促反應的時間為1-20小時，優選5-10小時。

3.根據權利要求1所述方法，其特點在于：2-O-脫硫酸基酶的用量0.1-10IU/g肝素，優選3IU/g肝素；所述用于反應液為50mM?NaCl，50mM咪唑pH6.5緩沖液，反應溫度為10-40℃，優選30-40℃，酶促反應的時間為1-20小時，優選5-10小時。