[發(fā)明專利]一種紅豆杉中紫杉醇的薄層色譜檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210460859.1
• 申請日: 2012-11-15
• 公開（公告）號: CN103808852A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉勝遠(yuǎn)
• 申請（專利權(quán)）人: 劉勝遠(yuǎn)
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測方法，具體涉及一種紅豆杉中紫杉醇的薄層色譜檢測方法。

背景技術(shù)

紫杉醇是紅豆杉屬植物中的一種復(fù)雜的次生代謝產(chǎn)物,也是目前所了解的惟一一種可以促進(jìn)微管聚合和穩(wěn)定已聚合微管的藥物。同位素示蹤表明，紫杉醇只結(jié)合到聚合的微管上，不與未聚合的微管蛋白二聚體反應(yīng)。細(xì)胞接觸紫杉醇后會在細(xì)胞內(nèi)積累大量的微管，這些微管的積累干擾了細(xì)胞的各種功能，特別是使細(xì)胞分裂停止于有絲分裂期，阻斷了細(xì)胞的正常分裂。通過Ⅱ-Ⅲ臨床研究，紫杉醇主要適用于卵巢癌和乳腺癌，對肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤、腦瘤也都有一定療效。

常規(guī)的紫杉醇檢測方法為HPLC檢測，填料為反相填料。流動相為乙腈-水，檢測器是紫外檢測器。

發(fā)明內(nèi)容

常規(guī)的HPLC檢測紫杉醇方法要求高：

⑴需要一臺HPLC，一臺HPLC價格通常10萬以上，HPLC價格高，普及率低；

⑵HPLC需要有專業(yè)的人員操作、維護(hù)和維修；

⑶HPLC檢測需要大量溶劑，大量溶劑的使用對環(huán)境也造成了極大的污染；

⑷HPLC檢測每次只能檢測一個樣品，檢測時間也長。

本發(fā)明提供了一種易于操作、能定性半定量和經(jīng)濟(jì)的薄層色譜檢測方法，該方法解決HPLC檢測的部分弊端。

一種紅豆杉中紫杉醇的薄層色譜檢測方法，所述方法包括如下步驟：

⑴稱取紫杉醇0.1～1mg，用1ml有機(jī)溶劑溶解，得到紫杉醇對照品溶液；

⑵將紅豆杉原料粉碎，用醇溶液浸提三次，合并三次浸提溶液，濃縮浸提溶液至原體積的1/3～1/2，用等體積有機(jī)溶劑Ⅰ萃取三次，合并三次萃取相，蒸干萃取相，稱取蒸干粉末0.1～1mg，用1ml有機(jī)溶劑Ⅱ溶解，得到樣品溶液；

⑶吸取步驟⑴和⑵制備的溶液各5～10μl，點(diǎn)在同一硅膠G薄層板上，展開劑是鹵代烴和醇，鹵代烴和醇的體積比是100：10～1，展開，取出，晾干，用5～10%濃硫酸乙醇溶液顯色，用105℃烘干薄層板至斑點(diǎn)顯色。

所述方法步驟中有的機(jī)溶劑優(yōu)選為甲醇、無水乙醇或N，N-甲基甲酰胺，N，N-甲基甲酰胺溶解紫杉醇溶解度高，甲醇和無水乙醇沸點(diǎn)低。

所述方法步驟⑴紅豆杉原料優(yōu)選為樹皮、枝葉和樹根。

所述方法步驟⑵醇溶液優(yōu)選為甲醇、無水乙醇、甲醇水溶液或乙醇水溶液。

所述方法步驟⑵有機(jī)溶劑Ⅰ優(yōu)選為二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯。

所述方法步驟⑵有機(jī)溶劑Ⅱ優(yōu)選為甲醇、無水乙醇或N，N-二甲基甲酰胺，N，N-甲基甲酰胺溶解紫杉醇溶解度高，甲醇和無水乙醇沸點(diǎn)低。

所述方法步驟⑶鹵代烴優(yōu)選為二氯甲烷或三氯甲烷。

所述方法步驟⑶醇優(yōu)選為甲醇或無水乙醇。

本發(fā)明有益效果是：

⑴紫杉醇檢測方法簡單、實(shí)用和經(jīng)濟(jì)。

⑵一次檢測可以同時檢測多個樣品。

⑶檢測結(jié)果可以定性和半定量。

具體實(shí)施方式

下述非限制性實(shí)施例可以使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。

實(shí)施例1

一種紅豆杉中紫杉醇的薄層色譜檢測方法，所述方法包括如下步驟：

⑴稱取紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)品0.5mg，用1ml甲醇超聲溶解，得到紫杉醇對照品溶液，濃度0.5mg/ml，作為定性和半定量的標(biāo)準(zhǔn)；

⑵將紅豆杉樹皮、枝葉和樹根粉碎，粉碎后用無水乙醇浸提三次，合并三次浸提溶液，減壓蒸餾法濃縮浸提溶液，真空度0.8MPa，水浴溫度55℃，濃縮至原體積的1/3，用等體積二氯甲烷萃取濃縮液三次，合并三次萃取相，減壓蒸餾法蒸干萃取相，真空度0.4MPa，水浴溫度35℃，稱取蒸干粉末0.5mg，用1ml甲醇超聲溶解，得到樣品溶液；

⑶用玻璃點(diǎn)樣毛細(xì)管吸取步驟⑴和⑵制備的溶液各10μl，點(diǎn)在同一硅膠G薄層板、距板底1cm處同一水平線上，展開劑是三氯甲烷和無水乙醇，三氯甲烷和無水乙醇的體積比是100：5，平衡5～10min，展開，展開至距板頂1cm處取出，取出，用熱風(fēng)吹干，用10%濃硫酸乙醇溶液顯色，用105℃烘干薄層板至斑點(diǎn)顯色。