[發明專利]裝載量子點和酶的脂質體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210460456.7
• 申請日: 2012-11-15
• 公開（公告）號: CN103808699A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 唐芳瓊;任湘菱;陳真真
• 申請（專利權）人: 中國科學院理化技術研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 李柏

技術領域

本發明屬于生物檢測領域，特別是涉及裝載量子點和酶的脂質體及其制備方法和應用。

背景技術

近年來量子點作為一種新型的熒光標記物質，其制備與應用研究得到了飛速的發展。數量眾多的研究報道集中于量子點熒光標記和用于構建生物傳感器。與之前研究常用的有機熒光染料相比，量子點有以下優點：（1）熒光發射比較穩定，其發光壽命可達ms級，且不易被光漂白；（2）熒光發射強度高，譜峰窄，峰形對稱；（3）發射波長隨粒徑的增大而有規律地紅移，改變粒徑就可獲得多色發光；（4）其激發光譜在吸收閾值以上幾乎是連續的，有利于多波長激發。因而基于量子點構建的生物傳感器具有更加優異的性能。

在基于量子點構建的各類生物傳感器中，檢測酶反應底物的生物傳感器是一大類。由于很多酶反應底物是人體生理反應的重要指標，例如血糖的高低是糖尿病病情的直觀表現，乙酰膽堿的多少是老年癡呆癥的重要標志等。因此研究準確、靈敏、快捷地檢測這些生理指標的新方法，有助于許多常見和重大疾病的早期診斷與監測，易于促進多種疾病早期診斷的普及化和家庭化，從而提高疾病的治愈率。酶反應具有很強的專一性，酶蛋白分子往往較抗體、抗原或基因蛋白等更易于獲得且生物活性相對穩定，價格便宜。所以構建酶法檢測生理指標的體系更為方便和價廉，易于推廣應用。

雖然目前基于量子點熒光檢測酶反應體系的研究報道日益增多，量子點已被應用于葡萄糖（X.Y.Li,Y.L.Zhou,Z.Z.Zheng,X.L.Yue,Z.F.Dai,S.Q.Liu,Z.Y.Tang,Langmuir,2009,25,6580-6586）、半乳糖（R.Freeman,L.Bahshi,T.Finder,R.Gill,I.Willner,Chem.Commun.,2009,764-766）、核酸（W.R.Algar,U.J.Krull,Anal.Chem.,2009,81,4113-4120）、乳酸脫氫酶（X.L.Ren,L.Q.Yang,F.Q.Tang,C.M.Yan,J.Ren,Biosensors?and?Bioelectronics,2010,26,271-274）等生理指標的檢測，本案發明人也申請了“量子點熒光檢測酶活性的方法”的專利（CN200910241266.4），但該方法仍然存在檢測靈敏度不高，線性范圍較窄，量子點發光長期穩定性較差等不足，嚴重制約了該方法向實際應用的推廣，因而亟待研究新的解決辦法。

脂質體（Liposome）是由磷脂和親脂型穩定劑（如膽固醇等）為膜材包合而成的囊泡，其薄膜是磷脂與親脂型穩定劑混合分子相互間隔定向排列的雙分子層，結構類似生物膜，又稱人工生物膜。它被作為藥物、基因、抗原、免疫佐劑的載體制劑等得到廣泛研究。特別是對于生物活性酶，通過脂質體的包覆，更能延長生物酶的壽命，有效地保持其活性，因此非常適宜裝載酶。近年來也有一些關于脂質體裝載量子點的研究，表明裝載在脂質體中的量子點保持了熒光性能，更有利于在生物體內應用（J.Y.Wang,J.F.Zhao,P.N.Wang,W.L.Yang,J.Y.Chen,J.Fluoresc.,2011,21,1635-1642）。但將量子點和酶共同裝載在脂質體中，用于酶反應底物檢測的研究還未見報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種裝載量子點和酶的脂質體，該裝載量子點和酶的脂質體可以檢測酶反應底物的濃度。

本發明的另一目的在于提供一種裝載量子點和酶的脂質體的制備方法，將量子點與酶共同裝載在脂質體中，以得到所述的裝載量子點和酶的脂質體。

本發明的再一目的是提供裝載量子點和酶的脂質體的應用，利用該裝載量子點和酶的脂質體檢測酶反應底物的濃度。

本發明的裝載量子點和酶的脂質體是在脂質體（如背景技術中所述，脂質體（Liposome）是由磷脂和親脂型穩定劑（如膽固醇等）為膜材包合而成的囊泡）中共同裝載有量子點和酶。

所述的脂質體中共同裝載有量子點和酶，其裝載的所述的酶的活力單位與量子點的質量比為3.2×10⁹:1~1.0×1.0¹²:1個活力單位/公斤。

所述的量子點是水溶性的CdTe量子點、CdTe/CdS量子點、CdTe/CdS/ZnS量子點、CdSe/ZnS量子點、ZnTe量子點或ZnSe量子點。

所述的酶為葡萄糖氧化酶、乳酸氧化酶、尿酸氧化酶、乙酰膽堿酯酶或膽堿氧化酶等。

所述的共同裝載有量子點和酶的脂質體的粒徑為30~350nm。