[發明專利]噻苯隆抗原及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201210460425.1
• 申請日: 2012-11-15
• 公開（公告）號: CN103804490A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 王保民;崔永亮;曹振;譚桂玉;李召虎
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K16/44;G01N33/53
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技術領域

本發明涉及一種噻苯隆抗原及其制備方法與應用。

背景技術

噻苯隆（Thidiazuron），化學名為1-苯基-3-（1,2,3-噻二唑-5-基）脲，CAS登記號：51707-55-2；分子式為：C₉H₈N₃OS；相對分子量為：220.2。噻苯隆在棉花種植上作落葉劑使用，被植株吸收后，可促進葉柄與莖之間的分離組織自然形成而脫落，是很好的脫葉劑。其化學結構式如下：

目前，噻苯隆的分析方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、液質聯用法（HPLC-MS/MS）等。但是這幾種檢測方法需要使用昂貴的儀器設備，檢測費用高，耗時長，不適用于現場快速檢測。與儀器分析法相比，免疫分析法具有快速、簡便、實時、易于進行現場檢測、樣品前處理簡單、靈敏度高、選擇性強、適合于高通量分析等優點，而且還能大幅度降低檢測成本。

發明內容

本發明的目的是提供一種噻苯隆抗原及其制備方法與應用。

本發明提供的式A所示噻苯隆抗原，

式A

式A中，n為0~6的整數；Protein表示載體蛋白，所述載體蛋白選自牛血清白蛋白、卵清蛋白和血藍蛋白中至少一種。

本發明提供了了式A所示噻苯隆抗原的制備方法，包括如下步驟：

（1）5-氨基-1,2,3-噻二唑與式B所示含有酯基的苯異氰酸酯進行反應得到式C所示化合物；

式B????????????????????????????????????????????????????式C

式B和式C中，n為0~6的整數；

（2）在酸或堿存在的條件下，式C所示化合物經水解反應得到式D所示化合物；

式D

式C中，n為0~6的整數；

（3）式D所示化合物和N-羥基琥珀酰亞胺在二環己基碳二亞胺或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽存在的條件下進行偶聯反應得到式E所示化合物；

式E

式E中，n為0~6的整數；

（4）式E所示化合物與載體蛋白經偶聯反應即得式A所示噻苯隆抗原；所述載體蛋白選自牛血清白蛋白、卵清蛋白和血藍蛋白中至少一種。

上述的制備方法中，步驟（1）中，式B所示含有酯基的苯異氰酸酯選自4-異氰酸酯基-苯甲酸乙酯、4-異氰酸酯基-苯乙酸乙酯、4-異氰酸酯基-苯丙酸乙酯、4-異氰酸酯基-苯丁酸乙酯、4-異氰酸酯基-苯戊酸乙酯和4-異氰酸酯基-苯己酸乙酯中至少一種。

上述的制備方法中，步驟（1）中，所述5-氨基-1,2,3-噻二唑與式B所示含有酯基的苯異氰酸酯的摩爾份數比可為（1~10）：1；

所述反應的溫度可為0~100℃，時間可為6~48小時；

所述反應的溶劑選自甲苯、苯和二甲苯中至少一種。

上述的制備方法中，步驟（2）中，所述酸選自濃鹽酸、濃硫酸、冰醋酸和甲酸中至少一種；所述堿選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉和碳酸鉀中至少一種。

上述的制備方法中，步驟（3）中，式D所示化合物、N-羥基琥珀酰亞胺與二環己基碳二亞胺的摩爾份數比可為1：（1~5）：（1~5）；

式D所示化合物、N-羥基琥珀酰亞胺與1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽的摩爾份數比可為1：（1~5）：（1~5）；

所述偶聯反應的溫度可為0~50℃，時間可為4~24小時。

上述的制備方法中，步驟（4）中，式E所示化合物與所述載體蛋白的摩爾份數比可為（5~30）：1；

所述偶聯反應的溫度可為0~50℃，時間可為8~36小時；所述偶聯反應在pH值為5~9的條件下進行；

式E所示化合物在所述載體蛋白的溶液中進行偶聯反應，所述載體蛋白的溶液是由所述載體蛋白加入至緩沖溶液中得到的，所述緩沖溶液選自碳酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液和4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液中至少一種，所述緩沖液的pH值均可為7.5；

步驟（4）之后，所述方法還包括將所述偶聯反應的反應體系進行透析的步驟；所述透析步驟中，所用透析液為pH值可為4~10、濃度可為0.01~0.2mol/L的磷酸鹽緩沖溶液。

本發明提供的噻苯隆抗原是噻苯隆與載體蛋白通過酰胺鍵連接形成的偶聯物；所述酰胺鍵是式D上的羧基通過活潑酯與載體蛋白上的氨基形成的。