[發明專利]一種Hydramacin-1抗菌肽突變體及其制備方法

有效

• 申請號: 201210458580.X
• 申請日: 2012-11-13
• 公開（公告）號: CN102924583A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 徐建華
• 申請（專利權）人: 紹興華泰生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 徐飛虎;徐關壽

1.一種Hydramacin-1抗菌肽突變體，所述突變體具有如Seq?ID?No.10所述的氨基酸序列，其中所述的第八個氨基酸X₁為天冬氨酸（D）、谷氨酸(E)或絲氨酸(S)。

2.根據權利要求1所述的Hydramacin-1抗菌肽突變體，其特征在于：所述序列中第八個氨基酸X₁為天冬氨酸（D），該突變體具有如Seq?IDNo.8所述的氨基酸序列。

3.編碼如權利要求1所述的Hydramacin-1抗菌肽突變體的基因，所述的基因序列具有如Seq?ID?No.9所述的核苷酸序列，其中第22-24位的核苷酸N₁N₂N₃為分別編碼天冬氨酸（D）、谷氨酸(E)或絲氨酸(S)的密碼子。

4.根據權利要求3所述的基因，其特征在于：所述的基因序列中第22-24位的核苷酸N₁N₂N₃為為編碼天冬氨酸（D）的密碼子，該基因具有如Seq?ID?No.7所述的核苷酸序列。

5.帶有如權利要求3-4任一項所述基因序列的載體。

6.根據權利要求5所述的載體，所述的載體選自酵母表達載體pPICZ-α-A、pHIL-D₂、pPIC9或pHIL-S₁，動物細胞表達載體pSVK3或pMSG。

7.根據權利要求6所述的載體，所述的載體為酵母表達載體pPICZ-α-A。

8.一種宿主系統，其由權利要求5所述的載體經轉化或轉染原核生物或真核生物宿主得到。

9.一種制備如權利要求1所述Hydramacin-1抗菌肽突變體蛋白的方法，包括如下步驟：

（1）、在Hydramacin-1抗菌肽突變體基因的兩端引入限制性酶切位點，通過酶切操作連接到酵母表達載體上;

（2）、將表達載體轉化導入酵母菌中，經篩選得到重組基因工程菌；

（3）、高密度發酵重組酵母菌，誘導表達后離心收集發酵上清液，經分離純化獲得重組Hydramacin-1抗菌肽突變體蛋白。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于：所述方法步驟（1）中，在Hydramacin-1抗菌肽突變體基因前端加入限制性內切酶XhoI的酶切位點，后端加入限制性內切酶XbaI的酶切位點，并在限制性內切酶XbaI的酶切位點前端連續加入兩個終止密碼子。