[發(fā)明專利]一種他立韋林的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210458404.6
• 申請日: 2012-11-14
• 公開（公告）號: CN102978264A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任洪發(fā);魯立;鄭明英;歐仁樹;林曉;黃桂基;寧異真
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東肇慶星湖生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12P19/28
• 分類號: C12P19/28;C12R1/13
• 代理公司: 深圳市君盈知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 44315
• 代理人: 楊利娟

1.一種他立韋林的制備方法，采用乙酰短桿菌Brevibacterium?acetylicum?ATCC39311菌株作為菌種，其特征在于包括如下步驟：

A、將菌種先進(jìn)行發(fā)酵得菌種發(fā)酵液，再將菌種發(fā)酵液進(jìn)行催化底物反應(yīng)，所述的催化底物反應(yīng)是指在菌種發(fā)酵液中加入底物，在55℃～65℃進(jìn)行酶催化反應(yīng)20小時(shí)～25小時(shí)得催化反應(yīng)液；

B、催化反應(yīng)液的后處理：步驟A催化反應(yīng)結(jié)束后，加入與催化反應(yīng)液相比，其重量百分含量為0.1～2.5%活性炭，助濾除菌，濾液真空減壓濃縮到有固體析出，冷卻到10±1℃，過濾除去固體雜質(zhì)，濾液加入0.3～1.0倍體積乙醇，冷卻結(jié)晶，5±1℃過濾收集濾餅，60±5℃下真空干燥，得到1-β-D-呋喃核糖基-1H-1,2,4-三氮唑-3-氰基；

C、氨解反應(yīng)與純化：在耐壓反應(yīng)釜中加步驟B的1-β-D-呋喃核糖基-1H-1,2,4-三氮唑-3-氰基、氯化銨和氨甲醇溶液，30℃～50℃反應(yīng)15小時(shí)～36小時(shí)；真空減壓濃縮至干，加入濃度為90%乙醇溶液結(jié)晶，抽濾，濾餅烘干，得到他立韋林。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的他立韋林的制備方法，其特征在于：所述步驟A的酶反應(yīng)底物是核苷和3-氰基-1,2,4-三氮唑；核苷濃度為10mmol/L～600mmol/L；所述核苷與3-氰基-1,2,4-三氮唑的摩爾比是1:1～1:1.5；所述的核苷是肌苷、鳥苷或腺苷中的一種或者兩種。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的他立韋林的制備方法，其特征在于：所述步驟C中1-β-D-呋喃核糖基-1H-1,2,4-三氮唑-3-氰基與氯化銨的摩爾比為1:1.0～1:1.5。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的他立韋林的制備方法，其特征在于：所述步驟A菌種發(fā)酵是指將菌種放入菌種培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵處理，所述菌種培養(yǎng)基的重量百分比配制為：葡萄糖0.1%～1.0%，酵母粉1.0%～5.0%，磷酸氫二鉀0.35%～1.50%，磷酸二氫鉀0.15%～1.50%，氯化鈉0.15%～1.00%，自來水90.00%～98.25%，發(fā)酵液pH值控制在6.0～6.9。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的他立韋林的制備方法，其特征在于：所述步驟A菌種發(fā)酵的發(fā)酵控制是采用發(fā)酵罐通風(fēng)發(fā)酵；罐壓為0.010～0.015MPa，發(fā)酵溫度為35℃～40℃，發(fā)酵時(shí)間為25小時(shí)～35小時(shí)。