[發(fā)明專利]大腸桿菌LuxS蛋白體外表達質(zhì)粒及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210456370.7
• 申請日: 2012-11-14
• 公開（公告）號: CN103805625A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃正蔚;王倩
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學醫(yī)學院附屬第九人民醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12Q1/68;C12Q1/02;C12R1/19
• 代理公司: 上海翼勝專利商標事務(wù)所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽;施春花

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物密度感應(yīng)機制研究領(lǐng)域，尤其涉及一種大腸桿菌LuxS蛋白體外表達質(zhì)粒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

密度感應(yīng)(quorum?sensing,QS)是一種微生物細胞間信息傳遞機制，即細菌通過合成、分泌并感知環(huán)境中的信號分子，以調(diào)節(jié)自身某些基因的表達^[1]。信號分子中，自誘導(dǎo)分子-2（autoinducer-2，AI-2）的產(chǎn)生基因保守存在于微生物中，故而其被認為參與了菌種間的信號傳遞^[2,3]。由于在自然狀態(tài)下微生物多以不同菌種混合存在的方式生存，并在菌種間存在廣泛的信息交流，所以AI-2這種菌群間的信息調(diào)控系統(tǒng)備受重視^[4]。研究其誘導(dǎo)的密度感應(yīng)機制，有利于理解微生物間生物學行為的調(diào)控，并為探索抑制微生物感染提供新的思路。

然而對于研究AI-2所介導(dǎo)的密度感應(yīng)系統(tǒng)的實驗來說，只有在體外高效的表達LuxS蛋白，繼而考察不同實驗組別的差異，才能使得實驗結(jié)果更可靠更有說服力，現(xiàn)有研究中有通過多肽合成的解決方案，但該方法技術(shù)復(fù)雜且成本較高，無法廣泛用于對比研究。本課題組在研究工作中探討通過表達質(zhì)粒的構(gòu)建獲得LuxS蛋白的體外表達，而要在體外獲得穩(wěn)定的luxS表達則需要一個良好的表達體系。載有強啟動子的高拷貝表達載體由于其構(gòu)建及表達過程便捷、經(jīng)濟，同時又具有穩(wěn)定以及可調(diào)節(jié)等特點，提供了快速有效地在體外構(gòu)建及表達LuxS的可能。目前未見有關(guān)于大腸桿菌LuxS蛋白體外表達質(zhì)粒的報導(dǎo)。

[1]?Xavier?KB,Bassler?BL.?Regulation?of?Uptake?and?Processing?of?the?Quorum-Sensing?Autoinducer?AI-2?in?Escherichia?coli?[J].J.Bacteriol,2005,?187(1):238–248.

[2]?Kendall?MM,?Rasko?DA,?and?Sperandio?V.?Global?Effects?of?the?Cell-to-Cell?Signaling?Molecules?Autoinducer-2,?Autoinducer-3,?and?Epinephrine?in?a?luxS?Mutant?of?Enterohemorrhagic?Escherichia?coli?[J].?Infect.Immun.?2007,75(10):4875–4884.

[3]?Surette?MG,?Miller?MB,?and?Bassler?BL.?Quorum?sensing?in?Escherichia?coli,?Salmonella?typhimurium,?and?Vibrio?harveyi:?A?new?family?of?genes?responsible?forautoinducer?production[J].?Proc.?Natl.?Acad.?Sci.?USA.?1999.96(4):1639-1644.

[4]?Vendeville?A,?Winzer?K.?Tang?CM,?et?al.?Making?'sense'?of?metabolism:?autoinducer-2,LuxS?and?pathogenic?bacteria[J].?Nat?Rev?Microbiol,?2005,3(5):383-396。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種可以高效便捷的表達LuxS蛋白的大腸桿菌LuxS蛋白體外表達質(zhì)粒及其應(yīng)用。

為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種大腸桿菌LuxS蛋白體外表達質(zhì)粒，其特征在于，通過限制性核酸內(nèi)切酶的作用，將體外PCR擴增出的LuxS基因片段消化并連接到載體pGEX4T-1上，構(gòu)建出大腸桿菌LuxS蛋白體外表達質(zhì)粒。

本發(fā)明亦提供了大腸桿菌LuxS蛋白體外表達質(zhì)粒在密度感應(yīng)信號系統(tǒng)研究中的應(yīng)用。?