[發明專利]一種金針菇、靈芝混菌發酵的方法

無效

• 申請號: 201210455815.X
• 申請日: 2012-11-14
• 公開（公告）號: CN102925527A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 董玉瑋;劉全德;苗敬芝;李勇;劉輝;張靜
• 申請（專利權）人: 徐州工程學院
• 主分類號: C12P39/00
• 分類號: C12P39/00;C12P19/04;C12R1/645
• 代理公司: 徐州市淮海專利事務所 32205
• 代理人: 華德明

1.一種金針菇、靈芝混菌發酵的方法，其特征是：該混菌發酵方法為：混菌發酵培養基由雙糖、多糖、淀粉類糧食、蛋白質類糧食組成，所述的混菌發酵培養基包括：10~20g/L淀粉、15~25g/L馬鈴薯、10~20g/L蔗糖、10~30g/L玉米、1~10g/L黃豆；采用液體深層發酵技術，混菌培養金針菇和靈芝；以金針菇和靈芝為菌種，經馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基活化、液體發酵培養制備單菌發酵種子液，混合接種金針菇、靈芝于混菌發酵培養基，接種比例1:1~3:1，溫度22~26℃，pH?4.5~5.5，培養時間是120~240h，混菌發酵后的菌絲和發酵液可用于發酵產物：生物量、多糖及三萜類化合物的提取與測定；

具體步驟如下：

（1）配制馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養基：按照GB4789.15—2010《食品衛生微生物學檢驗?霉菌和酵母計數》配制，用于菌種的復蘇及保存；

（2）菌種活化：取金針菇No.?5.65菌株和靈芝No.?5.786菌株分別接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養基上活化1~2次；

（3）分別制備單菌發酵種子液：取金針菇、靈芝活化后的菌塊分別接種于液體培養基中，22~26℃發酵培養168~288h；

（4）配制混菌發酵培養基：馬鈴薯去皮后切成約1cm³小塊，玉米、黃豆粉碎至顆粒大小為100μm，培養基組成為10~20g/L淀粉、15~25g/L馬鈴薯、10~20g/L蔗糖、10~30g/L玉米、1~10g/L黃豆，加水配制；先將馬鈴薯、玉米、黃豆加水煮25min，再加入溶解好的淀粉和蔗糖，加水定容后滅菌；

（5）制備混菌發酵種子液：取金針菇、靈芝單菌發酵種子液，接種于混菌發酵培養基中，共酵培養液酸堿度pH?4.5~5.5，接種量配比為1:1~3:1，共計5%，22~26℃發酵培養144~240h；

（6）分離生物量：發酵液過濾收集菌絲，60℃烘干至質量恒定并稱質量；

（7）胞外粗多糖提取與測定：發酵液過濾后離心取上清液，80~90?℃水浴濃縮成原體積的0.2~0.25倍，加入4~5倍體積95%乙醇，4℃靜置，濃縮液離心，用無水乙醇洗滌沉淀兩次，烘干至恒重，得胞外粗多糖；

（8）胞內三萜類化合物的提取：取1?g菌絲加50?mL甲醇靜置過夜后過濾，蒸干后加4?mL?95%乙醇溶解；

（9）胞外三萜類化合物的提取：取發酵液15mL，用3倍體積的水飽和正丁醇萃取3次，合并正丁醇提取液，減壓蒸干，加4mL?95%乙醇溶解。