[發明專利]一種獲得十字花科蔬菜新種質的方法及其應用方法

無效

• 申請號: 201210455776.3
• 申請日: 2012-11-13
• 公開（公告）號: CN103798125A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 趙宗武
• 申請（專利權）人: 天津子豐種業有限公司
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H4/00
• 代理公司: 天津濱海科緯知識產權代理有限公司 12211
• 代理人: 楊慧玲

技術領域

本發明屬于生物技術與單倍體育種技術領域，具體說，涉及一種通過游離小孢子培養方法快速獲得十字花科蔬菜新種質并應用于育種的方法。

背景技術

十字花科(2n=2x=20)蔬菜，分為小白菜亞種和大白菜亞種，小白菜亞種包括奶白菜、烏塌菜、菜心、小菘菜、油菜、矮腳黃、蕾用菜等，此亞種的特點為葉片開張、株型矮小、具明顯的葉柄，多數葉片光滑無毛，無明顯葉翼，不形成明顯葉球。大白菜亞種分化為散葉變種半結球變種、花心變種、結球變種，特點為株型較大，有明顯的葉柄和葉翼，葉面多不光滑、除散葉變種外，均可形成葉球。亞種之間和亞種內變種之間蔬菜性狀差異很大，由于染色體條數一樣，亞種之間和亞種內變種之間雜交不存在障礙，易獲得種子。通過有性雜交可以將不同亞種、變種蔬菜的優點綜合起來，雜交后代在基因型上是高度雜和的，而優勢雜交育種中需要的高度純和的親本，用常規方法自交、分離選擇再連續自交好幾個世代，費工、費時。隨著人們生活水平的提高，傳統方法用變種內、品種間雜交，難以滿足市場需要的高產、優質、形狀新奇的蔬菜的要求，而對亞種之間和亞種內變種之間雜種進行游離小孢子培養則可以快速獲得雙單倍體純系，且純系之間差異很大，提供了更大的選擇范圍，解決這一問題，滿足育種工作的需要。

截止目前，在幾乎所有蕓薹屬作物上均有小孢子培養成功的報道，1989年，日本學者Sato等在進行大白菜游離小孢子培養時獲得了再生植株，1992年，曹鳴慶等首次報道小白菜游離小孢子培養獲得成功，1996年，李光濤獲得了紫菜薹再生植株，此外，烏塌菜等也有培養成功的報道。基于十字花科作物亞種之間和亞種內變種蔬菜間雜交不存在障礙和在小孢子培養方面取得的進展，本發明以蕓薹屬‘大白菜亞種×小白菜亞種’、‘小白菜亞種×變種’雜交種作為小孢子培養的供體植株，對小孢子培養體系進行大量的試驗，獲得了很多再生植株，配制了雜交組合。

發明內容

本發明要解決的問題是提供一種獲得十字花科蔬菜新種質的方法及其育種方法，是將傳統的有性雜交技術和細胞培養技術結合起來，進行亞種之間和亞種內變種之間蔬菜雜交，通過游離小孢子培養方法對F₁或經篩選的符合育種目標的F₂培養，從而獲得再生植株，并應用于育種。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：一種獲得十字花科蔬菜新種質的方法，其包括如下步驟：

(1)對蕓薹屬‘大白菜亞種×小白菜亞種’或‘小白菜亞種×變種’蔬菜進行雜交獲得種子，種植F₁并自交獲得F₂；

(2)在溫室中培養F₁和F₂，F₁和F₂的種子經過2~4℃低溫處理20~25天，在開花期對F₁和F₂代中篩選出的符合育種目標的植株進行游離小孢子培養，接種小孢子后需33℃暗培養1天，再轉至25℃培養箱靜置暗培養10～15天，肉眼可見胚狀體后，將培養皿轉移到轉數為40～60轉/分鐘搖床上繼續暗培養，培養溫度為25℃；

(3)將子葉期胚狀體轉接到MS培養基以獲得再生植株；

(4)將再生植株接種到MS培養基上進行人工誘導生根，待再生植株生根后，移栽到溫室，溫室溫度白天應為20～25℃，夜間溫度應為于5～10℃；

(5)經50-70天后，再生植株開始開花，鑒定再生植株倍性，單倍體植株用秋水仙堿處理，使其加倍，雙單倍體植株、高倍體植株保留；

(6)對雙單倍體植株、高倍體植株自交授粉，獲得種子，同時測定親和指數；

(7)種植雙單倍體、高倍體自交種子，根據育種目標，鑒定植株株高、葉長、葉色等外觀性狀，鈣、鎂、維生素C諸營養指標，抗病、抗逆性。