[發(fā)明專利]環(huán)氧化物水解酶基因、編碼酶、載體、工程菌及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210455073.0
• 申請(qǐng)日: 2012-11-13
• 公開（公告）號(hào): CN102978220A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭裕國;薛鋒;柳志強(qiáng);鄒樹平;胡忠策;沈寅初
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/55
• 分類號(hào): C12N15/55;C12N9/14;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12P41/00;C12P17/02
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

1.一種環(huán)氧化物水解酶基因，其特征在于所述環(huán)氧化物水解酶基因的核苷酸序列為SEQ?ID?NO：1所示。

2.一種由權(quán)利要求1所述環(huán)氧化物水解酶基因編碼的環(huán)氧化物水解酶。

3.如權(quán)利要求2所述的環(huán)氧化物水解酶，其特征在于所述環(huán)氧化物水解酶的氨基酸序列為SEQ?ID?NO：2所示。

4.一種含權(quán)利要求1所述環(huán)氧化物水解酶基因的重組載體。

5.一種由權(quán)利要求4所述重組載體轉(zhuǎn)化得到的重組基因工程菌。

6.一種權(quán)利要求1所述環(huán)氧化物水解酶基因在制備重組環(huán)氧化物水解酶中的應(yīng)用。

7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用為：將含所述環(huán)氧化物水解酶基因構(gòu)建載體，再將載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌，獲得的重組基因工程菌進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)液分離獲得含環(huán)氧化物水解酶的菌體細(xì)胞。

8.一種含權(quán)利要求2所述環(huán)氧化物水解酶基因的環(huán)氧化物水解酶在制備手性環(huán)氧化物中的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用為：以含環(huán)氧化物水解酶的重組基因工程菌經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得的濕菌體為酶源，以外消旋環(huán)氧化物為底物，于pH?6~10緩沖液的反應(yīng)體系中進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，在20~?40℃條件下轉(zhuǎn)化反應(yīng)結(jié)束后，獲得的轉(zhuǎn)化反應(yīng)液即為含手性環(huán)氧化物的混合液，將混合液分離純化，獲得手性環(huán)氧化物。

9.如權(quán)利要求8所述含權(quán)利要求1所述環(huán)氧化物水解酶基因的環(huán)氧化物水解酶在制備手性環(huán)氧化物中的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用為：以含環(huán)氧化物水解酶的重組基因工程菌經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得的濕菌體為酶源，以外消旋環(huán)氧化物為底物，于pH?6~10緩沖液的反應(yīng)體系中進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，在20~?40℃、50~250r/min條件下轉(zhuǎn)化反應(yīng)0.05~?4h，反應(yīng)結(jié)束后，獲得的轉(zhuǎn)化反應(yīng)液即為含手性環(huán)氧化物的混合液，將混合液分離純化，獲得手性環(huán)氧化物；所述底物的初始濃度為0.05~80g/L，所述濕菌體的質(zhì)量用量以菌體干重計(jì)為0.05~?0.4g/g底物。

10.如權(quán)利要求8或9所述含權(quán)利要求1所述環(huán)氧化物水解酶基因的環(huán)氧化物水解酶在制備手性環(huán)氧化物中的應(yīng)用，其特征在于所述底物為外消旋環(huán)氧氯丙烷或外消旋苯基環(huán)氧乙烷。