[發(fā)明專利]斑馬魚測試水質(zhì)及其毒性的用途和方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210453903.6
• 申請日: 2012-11-13
• 公開（公告）號: CN102899383A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳峰
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院華南植物園;陳峰
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 天津濱海科緯知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12211
• 代理人: 楊慧玲

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及毒性檢測領(lǐng)域，具體涉及一種斑馬魚測試水質(zhì)及其毒性的用途和方法。

背景技術(shù)

水在環(huán)境作用下所表現(xiàn)出來的綜合特征，即水的物理性質(zhì)和化學(xué)成分。自然界中的水，是由各種物質(zhì)(溶解性和非溶解性物質(zhì))所組成的極其復(fù)雜的綜合體。水中含有的溶解物質(zhì)，直接影響天然水的許多性質(zhì)，使水質(zhì)有優(yōu)劣之分。

對日益惡化的水源污染問題，自來水廠所采取的方式便是加入大量超過標(biāo)準(zhǔn)的氯(漂白粉)來消毒殺菌。加氯雖然能夠殺死水中的各種病菌，但它一旦與水中的有機(jī)物結(jié)合，會因余氯或漂白粉的作用，產(chǎn)生大量有機(jī)氯化物(如三氯甲烷、二溴氯甲烷)，危害人體健康。有機(jī)氯化物在動物體系的試驗中已被確認(rèn)為致癌物質(zhì)。

簡單地檢測水質(zhì)的方法例如1.PH值試紙，標(biāo)準(zhǔn)：小于不小于7.5且不大于8.5，色度(鉑鈷色度單位)，比色法，自制標(biāo)準(zhǔn)液，標(biāo)準(zhǔn)：小于15，渾濁度(NTU-散射濁度單位)比色法，自制標(biāo)準(zhǔn)液，標(biāo)準(zhǔn)：小于1，臭和味：標(biāo)準(zhǔn)：無異臭、異味，肉眼可見物：標(biāo)準(zhǔn)：無

生活飲用水的水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)有很多，例如感官性狀，化學(xué)指標(biāo)，毒理學(xué)指標(biāo)，細(xì)菌學(xué)指標(biāo)，放射性指標(biāo)等。具體的，例如臭和味，濁度，水溫，氨氮、硝酸鹽氮、亞硝酸鹽氮、氏氮、總氮，正磷酸鹽、總磷，pH值，無機(jī)鹽如鈉，鉀，鈣，錳，鎂等，重金屬如鉛、汞、砷等，有機(jī)物：化學(xué)需氧量(COD)、生化需氧量(BOD)、高錳酸鉀指數(shù)、總有機(jī)碳(TOC)、有色可溶性有機(jī)物(CDOM)，溶解有機(jī)碳(DOC)，致癌物如二噁英，微生物如大腸桿菌、隱孢子蟲、蘭伯氏鞭毛蟲等。

目前的測試水質(zhì)的指標(biāo)過多，而且工程比較大，而且對于很多未知的危害因素?zé)o法預(yù)期測量，所以急需一種能夠快速測量水質(zhì)是否滿足飲用水的要求。

本發(fā)明發(fā)明人在科研過程中，有了一個驚奇的發(fā)現(xiàn)，即當(dāng)使用特殊的胚胎培養(yǎng)液培養(yǎng)斑馬魚時，在培養(yǎng)液中加入需要檢測的水源，能夠使胚胎對水質(zhì)的不良反應(yīng)在較短的時間內(nèi)表現(xiàn)出來，大大縮短了檢測周期。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題提供一種斑馬魚測試水質(zhì)及其毒性的用途和方法。為了解決上述問題，本發(fā)明采用以下的技術(shù)方案。

本發(fā)明提供一種斑馬魚測試水質(zhì)及其毒性的用途和方法，其特征在于包含如下步驟：

配制胚胎培養(yǎng)液，然后向胚胎培養(yǎng)液中加入待測水源，待測水源的加入體積與胚胎培養(yǎng)液的體積比為1∶3，用加入了待測水源的胚胎培養(yǎng)液培養(yǎng)斑馬魚胚胎，然后在12-24小時觀察記錄斑馬魚胚胎發(fā)育的畸形率和死亡率，來判斷待測水源對胚胎的毒性。其中胚胎培養(yǎng)液用pH為6.7-8.5的弱堿性水直接配制，胚胎培養(yǎng)液中含有5mM?NaCl、0.17mM?KCl、0.43mM?CaCl₂和0.33mM?MgSO₄。

上述方法中，斑馬魚胚胎通過如下方法選擇：

采卵前一天將性成熟的斑馬魚，按雌∶雄為1∶2的比例放入配缸內(nèi)并隔開，次日上午9:00自然交配并收集受精卵，用胚胎培養(yǎng)液清洗兩次收集得到的受精卵，并去除雜質(zhì)和壞卵，之后后置于胚胎培養(yǎng)液中，29.3℃進(jìn)行控光培養(yǎng)；當(dāng)2hpf時，在顯微鏡下挑選來自同一親本、正常發(fā)育比率達(dá)85％以上且發(fā)育時期一致的斑馬魚胚胎。

上述方法中，培養(yǎng)斑馬魚胚胎的方法如下：將斑馬魚胚胎用胚胎培養(yǎng)液清洗兩次，然后移入24孔板的樣孔中，每孔20枚，每孔滴加加入了待測水源的胚胎培養(yǎng)液，每孔4ml，隨后加蓋封閉，置于培養(yǎng)箱中，在29.3℃培養(yǎng)斑馬魚胚胎。

上述方法中，觀察記錄的時間是培養(yǎng)后第12、18、24小時，記錄畸形率和死亡率。

上述方法中，pH為7.0-7.8，優(yōu)選地，pH為7.2。

畸形是指斑馬魚體型與正常的相同培養(yǎng)時間單用胚胎培養(yǎng)液培養(yǎng)的斑馬魚體型有差異。

死亡是指用攪拌棒觸碰斑馬魚尾部時斑馬魚沒有任何反應(yīng)。

上述方法中，所述的待測水源為任何需要測量其對生物毒性的水源，優(yōu)選地，待測水源為天然泉水、河水、飲用水、工廠污水等，尤其優(yōu)選地是含有重金屬鉛和鉻超標(biāo)的待測水源，二氯甲烷或甲苯超標(biāo)的水源。