[發明專利]一種Vc二步發酵菌株的篩選方法

無效

• 申請號: 201210453520.9
• 申請日: 2012-11-13
• 公開（公告）號: CN102978131A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發明（設計）人: 徐慧;楊偉超;韓利濤;姜銘妍;徐靜;張忠澤
• 申請（專利權）人: 中國科學院沈陽應用生態研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/04;C12R1/085;C12R1/11;C12R1/07
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

1.一種Vc二步發酵菌株的篩選方法，其特征在于：將Vc二步發酵中的轉化菌和伴生菌混合培養于Vc二步發酵的種子液中，發酵液經離心后，所獲上清液為轉化菌溶液A；另將Vc二步發酵中的伴生菌接種于培養基中培養20-28小時，培養后經無菌濾膜過濾濾液為發酵液B；將轉化菌溶液A與發酵液B按2：1～8：1（v/v）混勻,而后進行稀釋，取稀釋液涂布于分離培養基上，在29-37℃培養4-8天后，形成轉化菌的菌落；再在形成轉化菌的菌落的分離培養基上加入0.1％濃度的無菌溴百里香酚蘭指示液，于常溫下靜置0.5～2小時，根據菌落周圍的黃色圈大小判斷轉化效率高低，從而快速篩選出具高效轉化能力的轉化菌株。

2.按權利要求1所述的Vc二步發酵菌株的篩選方法，其特征在于：所述混合菌由轉化菌和伴生菌構成；轉化菌為生酮基古龍酸菌，伴生菌為蠟樣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌或蘇云金芽孢桿菌中的一種；混合菌培養于Vc二步發酵的種子液中伴生菌的數量為3.0-6.0×10⁸個/ml。

3.按權利要求1所述的Vc二步發酵菌株的篩選方法，其特征在于：將Vc二步發酵中的伴生菌以15％（m/v）的接種量于培養基中培養20-28小時，培養液用孔徑0.22μm濾膜過濾除菌，所獲濾液為發酵液B。

4.按權利要求1所述的Vc二步發酵菌株的篩選方法，其特征在于：所述分離培養基按重量百分比計蛋白胨0.3％，牛肉膏0.3％，酵母膏0.3％，玉米漿0.3％，MgSO₄?0.01％，FeSO₄?0.01％,L-山梨糖2％，pH?7.0,瓊脂2.5％，余量為水；121℃高溫滅菌20min；待用。

5.按權利要求1所述的Vc二步發酵菌株的篩選方法，其特征在于：將上述生長了轉化菌菌落的分離培養基用0.1％濃度的無菌溴百里香酚蘭指示液覆蓋，隨后于常溫下靜置0.5～2小時，分離培養基上菌落周圍形成淺黃色圈，黃色圈大者為轉化效率高的菌株。