[發明專利]利用微量元素促進甘蔗組培苗生根的方法

無效

• 申請號: 201210453450.7
• 申請日: 2012-11-14
• 公開（公告）號: CN102907328A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 王俊剛;趙婷婷;張樹珍;楊本鵬;馮翠蓮;王文治;熊國如
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 海口翔翔專利事務有限公司 46001
• 代理人: 莫臻

技術領域

本發明屬植物栽培領域，涉及一種甘蔗組培苗生根的方法，具體是一種利用微量元素促進甘蔗組培苗生根的方法。

背景技術

甘蔗（Saccharum?officinarum?L.）是我國最主要的糖料作物，也是世界主要能源作物，甘蔗糖產量占我國食糖總產量的?90％以上。甘蔗是無性繁殖作物，也是多年宿根栽培作物，多年種植尤其是宿根種植易遭一些病原物的反復侵染和危害。甘蔗的主要病害為花葉病、宿根矮化病等，一般宿根矮化病可使甘蔗減產10～30%，花葉病使甘蔗減產10～40%，干旱地區病害更為嚴重。早在?20世紀?70年代末，巴西等國就開始對甘蔗健康種苗進行研究，80?年代中期，健康種苗生產已獲成功，并在甘蔗生產上推廣使用。國內的許莉萍等在90?年代開始通過組織培養和腋芽培養的方法培育甘蔗健康種苗，以去除甘蔗花葉病和宿根矮化病，能夠提高甘蔗產量15%以上，蔗糖份含量提高0.5%以上。

目前，甘蔗組培苗生產是利用適宜的人工培養基及光照、溫度等人工條件下，通過誘導出愈傷組織、不定芽、不定根等培養步驟，最后形成完整的植株，其幼苗根系吸收能力不強，抗逆性較差，假植成活率只有?70％左右，有時甚至低于?50％，大多都是因為瓶苗單一植株生根數少，二級根系不發達，假植后不能適應外界環境而死亡，雖然假植苗成活率受各種因素影響，但苗的生根質量程度對其至關重要。另外，隨著基因工程技術的發展，甘蔗分子育種也是性狀改良的重要手段，其培育過程同樣涉及甘蔗苗的組培，也存在轉基因小苗生根問題。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用微量元素促進甘蔗組培苗生根的方法，通過在生根培養基中添加微量元素，解決了組培苗單一植株生根數少、二級根系不發達的問題，有效地提高組培苗的生根數，提高假植成活率。

本發明所采用的技術方案：

一種利用微量元素促進甘蔗組培苗生根的方法，包括誘導培養過程、分化培養過程、增殖培養過程和生根培養過程，其具體步驟如下：

1、誘導培養過程

取成熟蔗莖并切成帶單芽或雙芽的莖段，進行預處理；以甘蔗腋芽為外質體，取1～2mm的莖尖分生組織接種到誘導培養基中進行培養；誘導培養基采用現有常用培養基。

2、分化培養過程

選取健壯腋芽生長點，接種到分化培養基中培養至分化出叢生芽；分化培養基采用現有常用培養基。

3、增殖培養過程

選取叢生芽接種到增殖培養基中進行增殖培養，培養?15?天即可增殖出叢芽；增殖培養采用現有常用培養基。

4、生根培養過程

將經過增殖培養的叢生芽分切成單株，接種到生根培養基中，在培養室溫度為?25℃～28℃，光照?12?h，光照強度為1300?lx～1600?lx?的條件下培養25～35?天，單株苗即可實現長大成生根苗。所述生根培養基是以MS培養基為基礎培養基，并添加1.0～1.5mg/L?NAA、?15.0～25.0g/L蔗糖、?6.0～10.0g/L?卡拉膠、微量元素；所述微量元素是指游離狀的鑭離子、鈰離子、硅離子、鐠離子、鈥離子、鉺離子、銩離子、鐿離子和镥離子，其含量分別為0.5～3.0mmol/L。

上述生根培養基的制備工藝：按配方先稱取卡拉膠、蔗糖，煮沸后再加入配方中的其余各種原料，用蒸餾水定容至所要配制的培養基總量后，再用1mol/L?的?NaOH溶液或1mol/L?的?HCl溶液調節?pH?值至5.8；然后，分裝到容器中封口；在?1.2?kg/cm²?壓力下滅菌?20分鐘，冷卻凝固后即為生根培養基。

在甘蔗的莖尖培養、腋芽繁殖、轉基因的愈傷組織分化培養過程中，經常出現芽叢生長旺盛，而轉入生根培養的時，苗的生根率不高，成活率低。為了探討有效增加甘蔗瓶苗生根數量的的方法，發明人將微量元素作為甘蔗組織培養的添加劑，設計了生根培養基，并作了生根培養基中使用上述游離狀的微量元素（濃度梯度分別為0～3mmol/L）對甘蔗單株組培苗生根率影響的試驗。結果見表1。

表?1?生根培養基中含不同濃度微量元素對組培苗芽生根的影響