[發明專利]生產達瑪二烯和原人參二醇的重組微生物及其構建方法

有效

• 申請號: 201210453416.X
• 申請日: 2012-11-13
• 公開（公告）號: CN102925376A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 張學禮;黃璐琦;戴住波;劉怡;張夏楠;施明雨;馬延和
• 申請（專利權）人: 天津工業生物技術研究所;中國中醫科學院中藥研究所
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12P33/00;C12R1/865
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種構建重組菌的方法，包括如下步驟：向釀酒酵母中導入達瑪二烯合酶編碼基因表達盒、原人參二醇合成酶編碼基因表達盒和煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-細胞色素P450還原酶編碼基因表達盒，得到重組菌1。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述向釀酒酵母中導入達瑪二烯合酶編碼基因表達盒、原人參二醇合成酶編碼基因表達盒和煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-細胞色素P450還原酶編碼基因表達盒為通過同源重組向釀酒酵母的rDNA位點中導入達瑪二烯合酶編碼基因表達盒、原人參二醇合成酶編碼基因表達盒和煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-細胞色素P450還原酶編碼基因表達盒；

所述達瑪二烯合酶編碼基因表達盒進一步具體包括啟動子PGK1、達瑪二烯合酶編碼基因PgDDS、終止子ADH1t；

所述原人參二醇合成酶編碼基因表達盒進一步具體包括啟動子TEF1、原人參二醇合成酶編碼基因PgPPDS和終止子CYC1；

所述煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-細胞色素P450還原酶編碼基因表達盒進一步具體包括啟動子TDH3、煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-細胞色素P450還原酶編碼基因AtCPR1和終止子TPI1。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述方法還包括如下步驟：提高所述重組菌1中的3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶的活性，得到重組菌2。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述提高所述重組菌1中的3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶的活性為向所述重組菌1中導入3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶編碼基因的表達盒；

所述向所述重組菌1中導入3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶編碼基因表達盒具體為通過同源重組向所述重組菌1的δ位點中導入3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶編碼基因表達盒；

所述3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶1編碼基因表達盒進一步具體包括啟動子PGK1、3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶編碼基因tHMG1和終止子ADH1t。

5.根據權利要求3或4所述的方法，其特征在于：所述方法還包括如下A-F中的任一一種：

A：提高所述重組菌2中的法呢基焦磷酸合酶的活性，得到重組菌3；

B：提高所述重組菌2中的鯊烯合酶的活性，得到重組菌4；

C：提高所述重組菌2中的鯊烯合酶和法呢基焦磷酸合酶的活性，得到重組菌5；

D：提高所述重組菌2中的鯊烯環氧酶和法呢基焦磷酸合酶的活性，得到重組菌6；

E：提高所述重組菌2中的鯊烯環氧酶和鯊烯合酶的活性，得到重組菌7；

F：提高所述重組菌2中的鯊烯環氧酶、鯊烯合酶和法呢基焦磷酸合酶的活性，得到重組菌8。