[發明專利]基于DNA電荷傳遞量子點電化學發光電極的制備方法

有效

• 申請號: 201210452679.9
• 申請日: 2012-11-12
• 公開（公告）號: CN102928489A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 李萌;魯理平
• 申請（專利權）人: 北京工業大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 北京思海天達知識產權代理有限公司 11203
• 代理人: 劉萍

1.基于DNA電荷傳遞量子點電化學發光電極的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)??雙鏈dsDNA的雜交：將冷凍保存的兩條單鏈ssDNA儲備液在搖床中室溫融??化，兩條單鏈ssDNA的序列分別如下：5’-SH-GACTGACCTCGGACG和??5’-NH₂-CGTCCGAGGTCAGTC；分別取相同摩爾數的ssDNA儲備液混合，將混合液??于90℃恒溫水浴5min，自然環境中冷卻至室溫，形成雜交的雙鏈dsDNA，?-20℃冷凍保存備用；

2)1mM?6-巰基己-1-醇MCH的配制：首先配制質量百分比濃度為5%的甘油磷酸緩沖液，然后用上述甘油磷酸緩沖液配制1mM?6-巰基己-1-醇MCH；

3)CdSe量子點的合成：將CdCl₂和巰基乙酸TGA混合后，用NaOH調節pH至10，注入硒源得到亮黃色澄清溶液，?其中Cd²⁺:TGA:Se²⁺的摩爾比為1:2.5:0.5；將所得的亮黃色澄清溶液于100℃冷凝回流4h，并將產物離心，所得的上清液即為量子點溶液，4℃避光保存；

4)金電極在絨布上打磨至表面光滑成鏡面，依次在水-丙酮-水中分別超聲，以去除電極表面的無機物和有機物；其中水的參數為以下，電阻率：18.2，總有機碳≤10，顆粒物＜1/ml，微生物＜1；

5)以表面清洗干凈的金電極為工作電極，鉑絲為對電極，飽和甘汞電極為參比電極，采用循環伏安方法在硫酸溶液中活化電極，活化40圈后結束立即取出電極，用水沖洗，備用；

6)滴加dsDNA和MgCl₂的混合液在金電極表面，室溫下保濕自組裝16h，此電極記為dsDNA/Au電極；

7)電極的清洗：用移液槍移取5mM?pH=7.0磷酸鹽緩沖溶液滴加到dsDNA/Au電極的表面，再移走此磷酸鹽緩沖溶液，這一步驟反復操作，以除去未連接牢固的dsDNA分子；

8)電極表面的封閉：在清洗后的dsDNA/Au電極的表面滴加1mM?6-巰基己-1-醇MCH，室溫下保濕組裝1h；

9)電極的清洗：用移液槍移取5mM?pH=7.0磷酸鹽緩沖溶液滴加到dsDNA/Au電極的表面，再移走此磷酸鹽緩沖溶液，這一步驟反復操作，以除去電極表面未連接牢固的MCH，此電極記為MCH封閉的dsDNA/Au電極；

10）DNA與量子點的連接：在量子點溶液中加入乙基-3-二甲基丙基碳二

亞胺鹽酸鹽EDC?和N-羥基琥珀酰亞胺NHS得到混合溶液，其中EDC和NHS的質量比例為2:1，將MCH封閉的dsDNA/Au電極浸入混合溶液中，反應?30min。