[發明專利]一種重組熱帶假絲酵母生產木糖醇的方法

無效

• 申請號: 201210452367.8
• 申請日: 2012-11-13
• 公開（公告）號: CN102943050A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發明（設計）人: 李春;郭曉曉;戴大章
• 申請（專利權）人: 北京理工大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12P19/02;C12R1/74
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種重組熱帶假絲酵母工程菌株C.tropicalis?PNL，其特征在于，將木聚糖酶和木糖苷酶基因表達盒串聯在一起，導入酵母表達載體pAUR123中，構建重組質粒pAUR123-xyn-xyl，將該質粒導入木糖利用型熱帶假絲酵母中。?

2.如權利要求1所述的重組熱帶假絲酵母工程菌株C.tropicalis?PNL，其特征在于，在木糖利用型熱帶假絲酵母中構建木聚糖降解途徑，所述重組菌株能共表達木聚糖酶和木糖苷酶。?

3.如權利要求1所述的重組熱帶假絲酵母工程菌株C.tropicalis?PNL，其特征在于，實現了木聚糖降解和木糖醇生產的耦合，能以天然半纖維素原料為底物進行全細胞法直接生產木糖醇。?

4.一種如權利要求1或2或3所述的熱帶假絲酵母工程菌株在利用玉米芯全細胞法發酵生產木糖醇中的應用。?

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述熱帶假絲酵母工程菌株C.tropicalis?PNL可通過如下步驟應用于木糖醇生產：?

(1)菌體種子液的制備：在搖瓶中按10-50%的裝液量加入種子培養基，種子培養基配方為：木糖(5-50g/L)、蛋白胨(1-10g/L)、酵母膏(1-10g/L)、K₂HPO₄(1-5gL)、MgSO₄·7H₂O(0.1-0.5g/L)、CaCl₂(0.1-0.5gL)，pH4.5-6.5，在100-130℃下滅菌10-30min后，在無菌條件下從活化平板上挑取單菌落接入上述搖瓶中，培養溫度為30-40℃，搖床轉速為150-300rpm，培養時間為12-30h，得到菌體種子液備用。?

(2)木糖醇的全細胞法發酵生產：在無菌條件下將上述步驟1制備好的菌體種子液，按1-15%的接種量接入盛有發酵培養基的搖瓶，裝液量為20-80%。所用發酵培養基配方為葡萄糖5-40gL、蛋白胨5-40g/L、酵母膏5-30g/L、玉米芯粉10-50gL，pH4.5-6.5。控制發酵溫度為30-40℃，搖床轉速為150-300rpm，發酵時間為24-120h。?

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于，步驟(1)中所述的種子培養基木糖含量為5-25gL，蛋白胨含量為3-8gL，酵母膏含量為1-5gL，K₂HPO₄含量為1-3g/L，MgSO₄·7H₂O含量為0.1-0.3g/L，CaCl₂含量為0.1-0.3g/L，pH4.5-5.5。?

7.如權利要求5所述的應用，其特征在于，步驟(1)中所述的培養條件為：種子培養基裝液量為15-35%，培養溫度為32-38℃，搖床轉速為160-200rpm。?

8.如權利要求5所述的應用，其特征在于，步驟(2)中所述的發酵培養基葡萄糖含量為10-25gL，蛋白胨含量為1-25gL，酵母膏含量為5-15g/L，玉米芯粉含量為10-30gL，pH4.5-5.5。?

9.如權利要求5所述的應用，其特征在于，步驟(2)中所述的培養條件為：接種量為3-10%，發酵培養基裝液量為30-60%，培養溫度為32-38℃，搖床轉速為160-200rpm，發酵時間為60-100h。?