[發明專利]一種橙皮甙含量的測定方法

有效

• 申請號: 201210450122.1
• 申請日: 2012-11-13
• 公開（公告）號: CN103091437A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 朱偉;薛紅芬
• 申請（專利權）人: 江蘇艾蘭得營養品有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 靖江市靖泰專利事務所 32219
• 代理人: 陸平

技術領域

本發明涉及生物測試領域，尤其涉及維生素C和柑橘生物類黃酮復合制劑中橙皮甙含量的測定方法。

背景技術

柑橘生物類黃酮是從柑橘果實中提取出來的一系列具有顯著生物活性的黃酮類化合物，柑橘類黃酮具有獨特的芳香性、良好的水溶性和顯著的藥理作用。柑橘類黃酮功能有：1、調節血脂，降低血液粘稠度，改善血清脂質，延長紅血球壽命并增強造血功能，預防心腦血管疾病。2、抑制HL-60白血病細胞生長和溶解癌細胞的作用。3、能夠有效清除體內的自由基及毒素，預防、減少疾病的發生。4、消炎、抗過敏、廣譜抗菌、抗病毒作用。維生素C具有抗氧化性，能保護人體免受自由基的傷害，有助鞏固細胞組織，強健骨骼和牙齒，增強免疫力，預防感冒等疾病及促進鈣、鐵的吸收，幫助膠原蛋白合成。在氧化還原代謝反應中起調節作用，缺乏它可引起壞血病。柑橘生物類黃酮可以防止維生素C被氧化破壞，而維生素C能促進柑橘生物類黃酮的生物活性，以適當的配比將兩者組成復合制劑，能產生協調作用，更好地發揮柑橘生物類黃酮和維生素C的保健作用。??

柑橘生物類黃酮和維生素C復合制劑尚未有正式的國家標準，在主要活性成分橙皮甙定量檢測方面沒有系統、完善的檢測方法。《中國藥典》2010版中陳皮的橙皮甙測定方法為：色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇：醋酸：水(35：4：61)為流動相，供試品提?。涸谒魇咸崛∑髦?，加石油醚(60～90℃)80ml，加熱回流2～3小時，棄去石油醚，藥渣揮干，加甲醇80ml，再加熱回流至提取液無色，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用少量甲醇分數次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。該方案如用于柑橘生物類黃酮混合物中橙皮甙的測定，一是供試品溶液雜質太多，等度洗脫不能將雜質完全清除，二是索氏提取樣品前處理復雜，前處理時間過長，三是沒有考慮到維生素C對于橙皮甙提取的干擾，該方法并不完全適用于柑橘生物類黃酮和維生素C復合制劑中橙皮甙的測定。因此，有必要針對該產品的特點制定橙皮甙的檢測方法。

發明內容

????本發明的目的是提供一種橙皮甙含量的測定方法，它操作簡便快捷、專屬性好和重復性好、回收率高、能夠準確測定橙皮甙的含量，便于柑橘生物類黃酮和維生素C復合制劑質量控制。

本發明是這樣實現的：一種橙皮甙含量的測定方法，其特征在于包括以下步驟：（1）稀釋溶液的制備：取20mmol/l的氫氧化鈉溶液和50%甲醇溶液按0.5～1.5：1.5～0.5比例混合均勻；（2）萃取溶液的制備：取75mmol/l的氫氧化鈉溶液和50%甲醇溶液按0.9～1.1：1.1～0.9比例混合均勻；（3）對照品溶液的制備：精密稱取橙皮甙和柚皮甙對照品適量，加稀釋溶液制成橙皮甙和柚皮甙濃度均為0.05mg/ml的對照品溶液；（4）供試品溶液的制備：精密稱取550-650mg樣品于100ml容量瓶中，加入80ml萃取溶液，60～70℃超聲提取10～20min，取出，冷卻至室溫后，用萃取溶液定容至刻度，取部分溶液用微孔濾膜過濾后備用；

（5）確定色譜條件：色譜柱：C18色譜柱，4.6mm×250mm，5μm；流動相A：0.1%三氟乙酸水溶液；流動相B：0.1%三氟乙酸的甲醇-乙腈1：1溶液；柱溫：35℃；流速：1ml/min；進樣量：20μl?；?檢測波長：292nm；按流動相A：流動相B=90%～10%～90%：10%～90%～10%進行梯度洗脫，梯度洗脫時間見圖1；保留時間：柚皮甙約?17.6min??橙皮甙約?18.0min；（6）檢測程序：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，在規定條件下，每針運行時間應三倍于橙皮甙的保留時間；系統適應性條件：完全分離兩種系統適應性物質，柱效應達到：理論塔板數大于2000，橙皮甙和柚皮甙的分離度大于1.5；通過測得數據計算橙皮甙含量??橙皮甙mg/g=A_樣×C_對×100/A_對×W_樣???式中：C_對：橙皮甙標準工作溶液濃度mg/ml；A_樣：樣品峰面積；A_對：橙皮甙標準工作溶液峰面積平均值；W_樣：樣品的質量mg。

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本發明操作簡便快捷、專屬性和重復性好、回收率高、能夠準確測定橙皮甙的含量，便于柑橘生物類黃酮和維生素C復合制劑質量控制。

附圖說明

圖1是本發明的梯度洗脫時間。

具體實施方式