[發(fā)明專利]轉(zhuǎn)基因植物材料消化率的體外測定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210449015.7
• 申請日: 2012-11-12
• 公開（公告）號(hào): CN102928581A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫哲;張宏福
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): G01N33/50
• 分類號(hào): G01N33/50
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域及蛋白鑒定及檢測領(lǐng)域技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及表達(dá)的外源基因蛋白在外的消化率繼續(xù)定量檢測測定技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種轉(zhuǎn)基因植物材料消化率的體外測定方法。

背景技術(shù)

地球上適于耕種的土地不足1％，其余為干旱、半干旱、冷土、沼澤和鹽堿地等。盡管如此，理論上地球可以供養(yǎng)比現(xiàn)在多得多的人口，但是優(yōu)良的土壤和良好的氣候及良好的耕作條件在時(shí)空上分布不均勻，與人口分布更不相稱。隨著人口數(shù)量的增加，人類需要更多的糧食，這種需求因越來越多的土地非農(nóng)田化、沙化、退化及氣候變化引起的頻繁自然災(zāi)害而更加嚴(yán)重；糧食問題已經(jīng)是全球面臨的嚴(yán)重問題，轉(zhuǎn)基因生物就是解決人類糧食問題的有效途徑之一。伴隨著轉(zhuǎn)基因生物的產(chǎn)生，轉(zhuǎn)基因生物的食用與飼用安全評(píng)價(jià)技術(shù)與方法也應(yīng)運(yùn)而生，而對于轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題隨著轉(zhuǎn)基因生物的產(chǎn)生就一直沒有停止過，尤其對于轉(zhuǎn)基因生物的外源基因及其蛋白的生物安全性問題。雖然理論上任何食物中都存在DNA，在消化道系統(tǒng)中的DNA能被很好地消化吸收，這意味著DNA分子并無毒性，但轉(zhuǎn)基因本身要受一些不確定因素的影響，進(jìn)而還具有非預(yù)期性效應(yīng)與結(jié)果，這種非預(yù)期性效應(yīng)與結(jié)果也是所有人所不想看到，甚至是無法接受的風(fēng)險(xiǎn)，所以如何對轉(zhuǎn)基因生物進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)問題就成為一個(gè)現(xiàn)實(shí)課題。

本申請人及其所在的課題組前期在國家轉(zhuǎn)基因重大專項(xiàng)基金“轉(zhuǎn)基因生物食用飼用安全性評(píng)價(jià)技術(shù)研究”(2008ZX08011-005；2010ZX08011-005；2013ZX08011-005)擇優(yōu)滾動(dòng)項(xiàng)目的資助下，對轉(zhuǎn)基因生物的飼用安全性從轉(zhuǎn)基因生物對動(dòng)物營養(yǎng)、免疫、微生態(tài)和殘留四個(gè)方面進(jìn)行了系統(tǒng)研究，其中營養(yǎng)、免疫和微生態(tài)都是從轉(zhuǎn)基因生物對試驗(yàn)動(dòng)物性能、形態(tài)、功能進(jìn)行對比研究，而殘留研究也僅在DNA水平上(PCR檢測)進(jìn)行了定性的檢測。而眾所周知的過敏與變態(tài)反應(yīng)就是在蛋白水平上的反應(yīng)，蛋白水平上也是衡量其安全性的一個(gè)重要方面，所以本發(fā)明是一個(gè)對轉(zhuǎn)基因生物表達(dá)的外源蛋白定量水平上(即檢測轉(zhuǎn)基因生物外源蛋白在動(dòng)物消化道的各段的消化率)的一個(gè)方法。

此外，涉及轉(zhuǎn)基因植物材料中，現(xiàn)有技術(shù)大都涉及大豆分離蛋白是以低溫脫溶大豆粕為原料生產(chǎn)的一種全價(jià)蛋白類食品。蛋白質(zhì)含量在90％以上，氨基酸種類有近20種，并含有人體必需氨基酸。其營養(yǎng)豐富，不含膽固醇，近年的研究證實(shí)，大豆蛋白具有肉類蛋白所不具有的保健價(jià)值，是植物蛋白中為數(shù)不多的可替代動(dòng)物蛋白的品種之一，對維系人類生命和保證人們的健康起著重要作用。但大豆蛋白分子結(jié)構(gòu)緊密，對酶解具有很強(qiáng)的抵抗力，不利于人體內(nèi)的消化和吸收，其生理活性和消化性是開發(fā)大豆蛋白加工技術(shù)的主要難題。因此，測定蛋白在人體內(nèi)的消化率對提高和改善大豆蛋白加工難題具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

目前對蛋白質(zhì)消化的研究方法主要有化學(xué)法分析、體內(nèi)消化法(人體及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)法)和體外模擬法等。化學(xué)分析法快速簡便，但這種利用概略養(yǎng)分分析所測得的蛋白養(yǎng)分與人體消化吸收養(yǎng)分間存在很大差異，不足以準(zhǔn)確地反映出蛋白的實(shí)際營養(yǎng)價(jià)值。體內(nèi)消化法(人體及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)法)是測定蛋白質(zhì)消化最好的方法，但是這種方法復(fù)雜、時(shí)間長、費(fèi)用高；且由于很多因素影響而很難做到。與前兩種方法相比，體外模擬法具有快速、簡便、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，雖體內(nèi)消化過程難以精確再現(xiàn)，但是，存在于體內(nèi)的條件是可以在體外再現(xiàn)的。通過對體內(nèi)真實(shí)情況的模擬，能很好的反映食物在體內(nèi)消化吸收，可在短時(shí)間內(nèi)對多個(gè)樣品進(jìn)行評(píng)定。