[發明專利]具有高區域選擇性酰化活性的細胞催化劑的制備方法及合成阿糖胞苷單酯的微生物方法

無效

• 申請號: 201210448191.9
• 申請日: 2012-11-12
• 公開（公告）號: CN102952770A
• 公開（公告）日: 2013-03-06
• 發明（設計）人: 李曉鳳;吳暉;趙光磊;余以剛;盧志洪
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/38;C12R1/39
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 何淑珍

1.一種具有高區域選擇性酰化活性的細胞催化劑制備方法，其特征在于：將初始菌株熒光假單胞菌Pseudomonas?fluorescens?GIM1.209種子液接種至含產酶誘導劑的液體培養基中，接種量為1%~12%，?20~40℃搖瓶培養24?~72?h，離心收獲濕菌體，經蒸餾水或緩沖液洗滌兩次后，真空冷凍干燥12-18?h制成微生物全細胞催化劑。

2.根據權利要求1所述具有高區域選擇性酰化活性的細胞催化劑制備方法，其特征在于所述產酶誘導劑包括Tween?80、Tween?85、Span?60、Span?80中的一種或兩種。

3.根據權利要求1所述具有高區域選擇性酰化活性的細胞催化劑制備方法，其特征在于以液體培養基總體積為基準，所述液體培養基的成分為：20~40g/L產酶誘導劑，0.5~50?g/L酵母膏，0.2?~4?g/L?MgSO₄·7H₂O，?2~15?g/L?(NH₄)₂SO₄，1?g/L?K₂HPO₄，液體培養基pH為6.8-7.5。

4.根據權利要求1所述具有高區域選擇性酰化活性的細胞催化劑制備方法，其特征在于所述緩沖液為pH?5.5~7.5的檸檬酸鹽或磷酸鹽緩沖液。

5.根據權利要求1所述的具有高區域選擇性酰化活性的細胞催化劑制備方法，其特征在于所制得的微生物全細胞催化劑區域選擇性在96%以上且催化轉化率在70%以上，具有高區域選擇酰化活性。

6.一種合成阿糖胞苷單酯的微生物方法，其特征在于以阿糖胞苷和羧酸酯為底物，以權利要求1所制得的微生物全細胞為催化劑，以吡啶-己烷、吡啶-異丙醚為反應介質發生酯合成反應，得到阿糖胞苷單酯產物。

7.根據權利要求6所述的一種合成阿糖胞苷單酯的微生物方法，其特征在于底物中阿糖胞苷含量為10~50?mmol/L，羧酸酯與阿糖胞苷的摩爾比為15:1~50:1，全細胞催化劑的用量為20~100?g/L反應體系，合成反應溫度為20~60?℃，反應過程振蕩速度60?rpm~240?rpm，反應時間在12-72?h，可得到阿糖胞苷單酯。