[發明專利]一種龍竹組培苗工業化生產快繁方法

有效

• 申請號: 201210446650.X
• 申請日: 2012-11-11
• 公開（公告）號: CN102919124A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 潘恒;張紹智
• 申請（專利權）人: 云南禾起生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 陳左

技術領域

本發明涉及到龍竹(Dendrocalamus?giganteus)組織培養的方法，特別是運用新生枝條作為外植體來誘導叢生芽，之后增殖培養和生根培養的龍竹組培苗工業化生產快繁方法。

背景技術

竹類的組織培養研究起始于1968年Alex-ander和Rao關于竹子合體胚的立體培養。從1982年Mehatas等首次報道印度莿竹(Bambus?arundinacea)通過胚性愈傷組織獲得再生植株開始，到2006年輝朝茂等報道通過胚性愈傷組織獲得珍惜竹種巨龍竹(Dendrocalamus?sinicus)的再生植株為止，已有數十種竹類可以通過組織培養獲短時間得完整試管苗植株。但是，竹類的組織培養技術由于所涉及的誘導芽、增殖培養和生根幾個環節相比其他禾本科植物較困難，并且因竹種的不同而差異性較大，這使得竹類的組織培養技術還沒有廣泛的運用于實際生產。

龍竹(Dendrocalamus?giganteus)，又稱苦龍竹、大竹，為大型叢生竹，竿高約20-30m，徑粗20-30cm。是云南省適應栽培區域最廣，用途最多，經濟價值最高的竹種之一。基于龍竹在云南省的廣泛栽培與應用，與其它竹種相比，人們對其進行了更為詳細、全面的研究，特別是對竹材性能和組織結構特性方面的深入了解為利用龍竹資源優勢，彌補其存在的缺點提供了豐富的資料。竹類植物由于生長繁殖快、再生能力強、成材時間短而具有優于其它林木的天然優勢，也正因如此，在長久的栽培過程中，諸如龍竹等經濟竹種的苗木培育和豐產經營技術得到了較快的發展和推廣。傳統的龍竹育苗方式主要有埋節、竹苗分株與枝條扦插等，但遠遠達不到工業化生產規模的要求。伴隨著組織培養技術的不斷成熟，參考相關竹類資源組織培養的成功經驗，總結龍竹組織培養中存在的問題，在龍竹組織培養上的突破是實現龍竹的工業化大規模生產，推進其進一步開發利用的有效途徑。

發明內容

針對龍竹工業化組織培養面臨的外殖體滅菌消毒極其困難，誘導叢生芽成功率低，增殖培養不穩定，生根困難等一系列難題，本發明要解決以下幾方面難題，使得龍竹組培苗工業化生產能夠順利進行。

1)?外殖體滅菌消毒：根據不同生長狀況的龍竹外殖體，配制相應的消毒液，采用發明的材料預處理方法，運用改進的消毒操作流程，使得外殖體消毒更為徹底，在很大程度上降低了污染率。

2)?叢生芽誘導：采用發明的腋芽預處理方法和改進的芽誘導培養基，將有效的提高叢生芽誘導成功率。

3)?增殖培養：鑒于龍竹的組織培養與其他竹種存在差異，設計出獨特的最為合理的龍竹增殖培養基，使其叢生苗增殖效果好且保持良好的遺傳性狀。

4)??誘導生根：同樣因為龍竹的組織培養與其他竹種存在差異，需要設計出獨特的最為合理的龍竹生根培養基，使得增殖苗能夠生根，并使生根率和生根效率達到最佳效果。

5)???練苗和大田栽培：根據龍竹組培苗的實際生長壯況，配制合理的練苗基質，采用適當的培養條件進行練苗培養，提高練苗的成活率。然后將成活的龍竹組培苗進行大田移栽，并進行實地栽培維護，保證成活和生長。

本發明通過如下技術方案實現：

一種龍竹組培苗工業化生產快繁方法，步驟如下：

（1）外殖體的采集和前期處理：采集生長狀況良好健康無病蟲害的一年生龍竹枝條，進行修剪去除次生枝葉，放置在4～8℃冰箱保存1～2天；然后按每個竹節一段將其削成小段，再削除竹節上的稈籜，并用紗布擦除枝稈表面的污垢，最后用無菌水洗凈；

（2）將洗好的龍竹枝條段在無菌條件下進行三次消毒處理：首先用濃度75%的乙醇擦洗后用無菌水沖洗干凈；然后將龍竹枝條段投放到消毒瓶中濃度0.1～1%的升汞水溶液中進行第二次消毒10～20min；再將龍竹枝條段投入濃度1.5～5%的次氯酸鈉水溶液中進行第三次消毒；最后用無菌水沖洗3～5次；

（3）腋芽的誘導：將經過消毒的龍竹枝條段插入芽誘導培養基中進行誘導培養，培養溫度為25℃，先暗培養3～5天，然后再進行光照培養，光照強度為1000～1200Lx；所述的誘導培養基為1/2MS，其中含有6-BA?5.0～10.0mg/L、2，4-D?2.0～5.0mg/L、NAA?0.5～1.5mg/L、蔗糖10～20mg/L和瓊脂3.5～5.0g/L；