[發明專利]人hcrcn81的原核重組質粒及其所表達的蛋白與兔抗人多克隆抗體及用途

無效

• 申請號: 201210445862.6
• 申請日: 2012-11-09
• 公開（公告）號: CN102936604A
• 公開（公告）日: 2013-02-20
• 發明（設計）人: 陳堯;溫曉霞;王凱程
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/74;C07K14/47;C07K16/18;C07K16/06;G01N33/68
• 代理公司: 成都科海專利事務有限責任公司 51202
• 代理人: 黃幼陵;馬新民

1.一種人hcrcn81的原核重組質粒，其特征在于由序列表中SEQ?ID?NO.1中的基因片段與原核表達載體構建而成，所述基因片段是SEQ?ID?NO.1中第73位至第573位的核苷酸序列，所述的基因片段正向插入原核表達載體。

2.根據權利要求1所述人hcrcn81的原核重組質粒，其特征在于原核表達載體為pET質粒系統，包括pET-28a?、pET-30a、pET-32a或?pET32a?(+)。?????

3.一種重組人HCRCN81蛋白質，其特征在于由權利要求1或2所述的原核重組質粒表達而成，其氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?NO.2所述。

4.一種兔抗人多克隆抗體，由權利要求3所述重組人HCRCN81蛋白質免疫新西蘭大耳白兔后收集抗血清純化得到。

5.根據權利要求4所述兔抗人多克隆抗體，其特征在于制備方法依次包括以下步驟：

（1）通過RT-PCR反應，獲得人HCRCN81蛋白質編碼基因，即序列表SEQ?ID?NO.1中第73位至第573位的核苷酸序列；

（2）將步驟（1）擴增的人HCRCN81蛋白質編碼基因插入到原核表達載體構建原核重組質粒，再將所述原核重組質粒轉化至感受態細菌中進行培養，然后篩選出含有正確插入片段的克隆；

（3）利用PCR擴增和限制性內切酶酶切圖譜分析所述原核重組質粒，并進行DNA序列分析；

（4）將正確克隆的原核重組質粒轉化入工程菌中進行表達，分離純化表達的蛋白即獲得重組人HCRCN81蛋白質；

（5）采用SDS-PAGE、質譜分析鑒定重組人HCRCN81蛋白質的正確性；

（6）將所述重組人HCRCN81蛋白質免疫新西蘭大耳白兔后收集抗血清；

（7）采用抗原親和純化方法從步驟（6）所收集的抗血清中獲得兔抗人多克隆抗體。

6.權利要求4所述兔抗人多克隆抗體在制備檢測人癌細胞和人組織中hcrcn81基因所表達的蛋白質的檢測劑方面的應用。