[發(fā)明專利]一種文昌魚細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)蛋白及其表達基因與應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210441928.4
• 申請日: 2012-11-07
• 公開（公告）號: CN102925449A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馮力駿;張妍;孔雨;張長青;董璇;閆杰;荊韌威;李開霖;劉歡歡;劉凱興
• 申請（專利權(quán)）人: 山東大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/63;C12N1/21;C07K14/435;A61K48/00;A61P31/04
• 代理公司: 濟南金迪知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37219
• 代理人: 王緒銀

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種文昌魚細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)蛋白及其表達基因與應(yīng)用，特別是一種海洋模式生物文昌魚細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)蛋白BbtSmad6/7及其表達基因與應(yīng)用，屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

轉(zhuǎn)化生長因子家族（Transforming?Growth?Factor-beta，TGFβ）參與細胞分裂、分化、遷移、附著、死亡和免疫應(yīng)答等細胞活動。TGF-β通過與特異受體結(jié)合行使生理功能。TGF-β配體-受體的相互作用及下游的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑被廣泛研究。最經(jīng)典的信號通路模式是，TGF-β與活化的TGFR-II結(jié)合，促進TGFR-I的富集和磷酸化。活化的TGFR-I通過在細胞內(nèi)磷酸化R-Smad（receptor-activated?members?of?the?Smad）起始信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。激活的R-Smad與Smad4相互作用并與轉(zhuǎn)錄輔助因子一起轉(zhuǎn)移到細胞核內(nèi)，異構(gòu)復(fù)合物調(diào)控靶基因的表達。I-Smad（inhibitory?Smad），如Smad6或Smad7，阻止R-Smad磷酸化和R-Smad/Smad4異構(gòu)復(fù)合物向細胞核的轉(zhuǎn)移，從而負調(diào)控TGF-β的誘導(dǎo)效應(yīng)。在細胞核內(nèi)，Smad復(fù)合物解體，磷酸化的R-Smad通過核磷酸酶（如PPM1A/PP2C）解磷酸化，使Smad游離并運往細胞質(zhì)。只要活性受體存在，這種循環(huán)就一直延續(xù)。有目的地調(diào)控和干預(yù)Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，有助于促進對創(chuàng)傷愈合與胚胎發(fā)育的理解，加深對腫瘤發(fā)生、發(fā)展的認識等。

Smad家族成員有3種：受體活化型或通路限制型Smad（R-Smad)，共同通路型Smad（Co-Smads)和抑制型Smad（I-Smads）。I-Smad（inhibitory?Smad），如Smad6或Smad7，阻止R-Smad磷酸化和后續(xù)的R-Smad/Smad4異構(gòu)復(fù)合物的核定位。I-Smad的誘導(dǎo)表達對TGF-β信號傳導(dǎo)進行負反饋調(diào)控。I-Smad含有C端MH2結(jié)構(gòu)域缺少MH1結(jié)構(gòu)域。Smad6通過打破Smad1與Co-Smad間的聯(lián)系阻抑BMP信號通路并形成無活的Smad1/Smad6復(fù)合物。另外，Smad7通過結(jié)合TGF-β、activin和BMP?type?I?receptor阻止R-Smad磷酸化。靶基因轉(zhuǎn)錄后Smad復(fù)合物從染色質(zhì)上被釋放并經(jīng)歷泛素化（ubiquitination）。

我們對文昌魚中的I-Smad基因進行了分離，并將其命名為Bbsmad6/7，并發(fā)現(xiàn)細菌沖擊后BbSmad6/7基因轉(zhuǎn)錄發(fā)生上調(diào)，這說明TGFβ-SMAD信號通路很可能參與了免疫應(yīng)答。

文昌魚既具有脊椎動物的基本特征，又具有許多無脊椎動物的特征。深入開展文昌魚免疫系統(tǒng)的研究不僅有助于闡明脊椎動物和人類免疫性的起源和進化，更可以與其它海洋生物進行縱向比較，幫助我們找到海洋生物特異的防御機制，認識和闡明海水養(yǎng)殖動物免疫防御機制對病原感染應(yīng)答的規(guī)律，為海水養(yǎng)殖動物的病害控制提供新思路，為病害的免疫防治技術(shù)提供理論依據(jù)。從而為我國海水養(yǎng)殖業(yè)的健康、持續(xù)發(fā)展提供有力的保障和促進。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種文昌魚細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)蛋白及其表達基因與應(yīng)用。

術(shù)語說明

1.PCR技術(shù)：鏈式聚合酶反應(yīng)，利用DNA聚合酶，模板，引物以及dNTP進行體外擴增特定DNA片段的技術(shù)。

2.CDD析軟件：NCBI網(wǎng)站上提供的一種用來推測和分析特定氨基酸序列形成的結(jié)構(gòu)域信息的軟件。

本發(fā)明技術(shù)方案如下：

一種海洋模式生物文昌魚細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)蛋白BbSmad6/7的表達基因，核苷酸序列如SEQID?No.1所示。

一種海洋模式生物文昌魚細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)蛋白BbSmad6/7，氨基酸序列如SEQ?ID?No.2所示。

一種重組載體，插入了SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列。該重組載體由pEASY-T3載體插入SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列獲得，該表達載體購自德國Novagen公司。

一種重組大腸桿菌，轉(zhuǎn)入了上述SEQ?ID?No.1所示核苷酸序列或上述重組載體。

上述文昌魚細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)蛋白BbSmad6/7的表達基因、重組載體或重組大腸桿菌在制備海水養(yǎng)殖免疫防治藥物中的應(yīng)用。

有益效果