[發明專利]條石鯛性別連鎖的微衛星標記及其遺傳性別鑒定方法

無效

• 申請號: 201210441669.5
• 申請日: 2012-11-08
• 公開（公告）號: CN102899323A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發明（設計）人: 徐冬冬;樓寶;李三磊;孫鑫序;辛儉;耿智;詹煒
• 申請（專利權）人: 浙江省海洋水產研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于水產生物技術領域中的魚類分子標記和遺傳性別鑒定技術，是一種條石鯛性別連鎖的微衛星標記及其遺傳性別鑒定方法。

背景技術

條石鯛隸屬于鱸形目(Perciformes)、石鯛科(Oplegnathidae)、石鯛屬(Oplegnathus)，自然分布于太平洋和印度洋沿岸，我國產于黃海、東海和臺灣海峽，是一種暖溫性海洋中下層魚類。它生長速度快、肉質鮮美、抗病力強、色澤艷麗，具有較高的食用價值和觀賞價值。

條石鯛的染色體核型分析發現，雄魚的染色體數為47，核型為3m+44t，雌魚的染色體數為48，核型為2m+46t；雄魚具有1條巨型的異型性染色體，沒有其他染色體與之配對(徐冬冬等，水生生物學報，2012)；性染色體的發現為開展條石鯛性別連鎖標記的篩選奠定了基礎。條石鯛第一次性成熟需要3～4年，性別連鎖標記能夠在幼苗時期準確辨別其性別特征，有利于在人工繁育及選擇育種過程的雌雄篩選。同時，性別連鎖標記也為確定性別決定主效區奠定基礎。因此，開展條石鯛性別差異的分子標記或基因的研究，找到與性別連鎖的分子標記或基因，將對條石鯛的性別控制及性別決定機制研究具有重要的理論價值與應用價值。

目前，利用分子標記進行基因組掃描，已經篩選到了與一些經濟魚類的性別相關的分子標記。但是這些標記不具有通用性，僅能用于單一物種甚至單一品系的性別鑒定。在條石鯛性別相關標記篩選方面，利用AFLP技術已經篩選到4個與性別特異的分子標記，轉化成SCAR標記后能夠通過簡便的PCR方法鑒定條石鯛的遺傳性別(目前已經申請專利，專利號：201110228374.5)。但是，AFLP標記作為顯性遺傳的分子標記，無法區分純合子和雜合子。到目前為止，可用于條石鯛性別鑒定的標記還非常缺乏。微衛星標記是由1-6個堿基組成的短串聯重復序列，呈現共顯性遺傳的特點，能夠區分純合子和雜合子。因此，條石鯛微衛星連鎖的性別標記篩選，不僅能夠建立準備高效的遺傳性別鑒定方法，還有助于條石鯛性別決定區地確定及性別差異基因的篩選研究。有關條石鯛性別連鎖的微衛星標記及遺傳性別檢測技術，目前國內外均未見文獻報道。

發明內容

針對現有技術中不易鑒定條石鯛幼魚的缺陷，本發明提供了一種條石鯛性別連鎖的微衛星標記及其遺傳性別鑒定方法，為條石鯛的定向育種提供理論和技術上的指導。

為實現上述發明目的，本發明采用下述技術方案予以實現：

本發明提供了一種條石鯛性別連鎖的微衛星標記，所述雄性特異的微衛星標記Nibea13的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示：

ACAAT?GTGAC?TGTCC?CTACT?GTGTC?TCTTC?TTCTT?TCAGC?CTCTT?TAATG?CTCTC?CTGTC?TGTCT?GTCTG?TCTGT?GTCTC?CATTT?CTCTC?AGTAT?CAAGC?CGTTC?TCTCA?GTAAG?CCTAC?TCTGT?GCAGA?CAGCA?GGGAC?CACCA?CAATC?TCAGG?TGAGA?GGGAC?CGCGA?TACAA?TTATC?TCCTTT?CTGTA?AAGCG?AACAG?GCGGT?CTGCTC?TCCTG?CCATT?TAG

所述分子標記Nibea13的引物序列如下：

SEQ?ID?NO：2：5′-GTGTCTCTTCTTCTTTCAGCCTCT-3′

SEQ?ID?NO：3：5′-TGAGATTGTGGTGGTCCCTG-3′

本發明還提供了一種條石鯛遺傳性別鑒定方法，步驟如下：

1)提取條石鯛的基因組DNA；

2)以條石鯛的基因組DNA為模板、SEQ?ID?NO：2和SEQ?ID?NO：3為引物進行PCR擴增；

3)對步驟2得到的PCR產物在6％的變性聚丙烯酰胺上進行電泳，銀染顯帶，擴增出A、B兩個等位基因，擴增出A等位基因的一定為雄性個體。

所述步驟2)的PCR擴增條件如下：

94℃預變性5min，94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸60s，共35個循環，最后72℃延伸10min。

與現有技術相比，本發明的優點和積極效果是：