[發(fā)明專利]一種藻類來源的植酸酶PHYN2及其基因和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210441235.5
• 申請日: 2009-12-15
• 公開（公告）號: CN103114081A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姚斌;黃火清;楊培龍;羅會(huì)穎;石鵬君;袁鐵錚;王亞茹;柏映國;孟昆;史秀云
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所
• 主分類號: C12N9/16
• 分類號: C12N9/16;C12N15/55;C12N1/21;C12P7/18;C12R1/19
• 代理公司: 北京法思騰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11318
• 代理人: 高宇

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種藻類來源的植酸酶PHYN2及其基因、包含該基因的重組載體和應(yīng)用。

背景技術(shù)

植酸酶是一類能水解植酸的酶類。它能將植酸磷降解為肌醇和磷酸。單胃畜禽和淡水魚類飼料中都需要使用植酸酶，但它們對植酸酶的性質(zhì)有不同的要求。對單胃畜禽而言，植酸酶的主要作用場所是單胃動(dòng)物酸性的胃中，因而要求植酸酶在酸性條件下要有較高的酶活性，即酶反應(yīng)的最適pH值為酸性的植酸酶。對于淡水養(yǎng)殖的主要魚類—鯉科魚類，因?yàn)樗鼈儫o胃，只有pH值呈中性(pH6.5～8.0)的腸道，因而在魚類飼料中必需使用在中性pH值條件下有高活性的植酸酶。目前商品化生產(chǎn)的用于單胃畜禽的植酸酶在中性pH值環(huán)境下基本沒有酶活性，因而不能用于鯉科魚類飼料。

植酸酶廣泛存在于微生物中，如枯草芽孢桿菌、假單孢桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌、酵母及曲霉等。藻類生物數(shù)量龐大，且其生物特性呈現(xiàn)多樣化，利用藻類可以生產(chǎn)許多稀有的天然活性物質(zhì)，如色素、抗生素、抗病毒和真菌類藥物、抗癌藥物，以及微藻脂肪酸、多糖、維生素和甾醇等，因此利用藻類獲得新型植酸酶也將是其開發(fā)應(yīng)用的重要領(lǐng)域之一。據(jù)了解，到目前為止，還沒有來源于藻類的植酸酶基因的表達(dá)及性質(zhì)研究的報(bào)道。

從整個(gè)植酸磷的循環(huán)模式來看，植酸磷可從陸地環(huán)境轉(zhuǎn)移進(jìn)入水體環(huán)境中，特別是在養(yǎng)殖業(yè)密集的區(qū)域，由于大量植物性日糧中的植酸，在單胃動(dòng)物消化道中沒有被水解，而隨著糞便被排泄到體外，這些高植酸含量的糞便直接進(jìn)入農(nóng)田，但大部分植物并不能直接利用植酸，這些植酸會(huì)隨著雨水流入附近的水域，而水域中的藻類可以利用植酸磷作為磷源，迅速生長造成赤潮和水體富營養(yǎng)化。所以，我們推測養(yǎng)殖業(yè)密集的區(qū)域的水體環(huán)境發(fā)生赤潮和富營養(yǎng)化，與藻類能直接利用植酸有一定的關(guān)系。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種藻類來源的植酸酶。

本發(fā)明的再一目的是提供上述藻類來源的植酸酶的基因。

本發(fā)明的再一目的是提供包括上述植酸酶基因的重組載體。

本發(fā)明的再一目的是提供上述植酸酶基因的重組菌株。

根據(jù)本發(fā)明的含藻類來源植酸酶的重組菌株，所述植酸酶的氨基酸序列如SEQID?NO.1，其保藏編號為CGMCC?No.3496。

根據(jù)本發(fā)明的含藻類來源植酸酶的重組菌株，所述植酸酶的氨基酸序列如SEQID?NO.2，其保藏編號為CGMCC?No.3494。

根據(jù)本發(fā)明的含藻類來源植酸酶的重組菌株，所述植酸酶的氨基酸序列如SEQID?NO.3，其保藏編號為CGMCC?No.3495。

本發(fā)明的再一目的是提供制備上述植酸酶的方法。

本發(fā)明的再一目的是提供上述植酸酶的用途。

根據(jù)本發(fā)明的藻類來源的植酸酶，為中性、其結(jié)構(gòu)域?yàn)棣?折疊桶狀。

根據(jù)本發(fā)明的藻類來源的植酸酶，其中，所述藻類藍(lán)藻，優(yōu)選所述藍(lán)藻為點(diǎn)狀念珠藻、無類囊體藍(lán)藻、或念珠藻。

根據(jù)本發(fā)明的藻類來源的植酸酶，其中，所述植酸酶的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2、或SEQ?ID?NO.3所示。

本發(fā)明提供了編碼上述藻類來源的植酸酶的基因，其中，所述植酸酶基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5、或SEQ?ID?NO.6所示。

本發(fā)明還提供了包含上述植酸酶基因的重組載體。

本發(fā)明還提供了包含上述植酸酶基因的重組菌株。

根據(jù)本發(fā)明的制備上述植酸酶的方法包括以下步驟：

1）構(gòu)建上述包含植酸酶基因的重組載體；

2）轉(zhuǎn)化宿主菌，并表達(dá)；

3）分離純化得到所述植酸酶。

根據(jù)本發(fā)明的藻類來源的植酸酶可以用于魚類飼料。