[發明專利]葡萄糖醛酸縮硫醇-乙酸酯衍生物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210441022.2
• 申請日: 2012-11-07
• 公開（公告）號: CN102936235A
• 公開（公告）日: 2013-02-20
• 發明（設計）人: 王鳳芹;楊航仙;汪以真
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07D307/33
• 分類號: C07D307/33;G01N30/02
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高

技術領域

本發明涉及一種葡萄糖醛酸縮硫醇-乙酸酯衍生物及其制備方法和應用。?

背景技術

在多糖的結構研究中，單糖組成分析是必不可少的環節。常見的單糖分析方法有柱前衍生化高效液相色譜法，主要的衍生化試劑有1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP），1-(2-萘基)-3-甲基-5-吡唑啉酮（NMP），對氨基苯甲酸（p-AMBA）。衍生化后的產物經HPLC分離、紫外檢測器檢測。另外，采用較多的是氣相色譜法，因為單糖本身沒有足夠的揮發性，必須在氣相色譜分析之前預先轉化成易揮發、對熱穩定的衍生物，常見的單糖衍生物有三甲基硅醚衍生物、糖肟三甲基硅醚衍生物、糖腈乙酸酯衍生物、糖醇乙酸酯衍生物和三氟乙酸酯衍生物等。在這些衍生化方法中，糖醛酸不能糖腈乙酸酯衍生化和糖醇乙酸酯衍生化（Foster?C?E,?Martin?T?M,?Pauly?M.?J?Vis?Exp,?2010,?37?:?1）。?Hama等（Hama?Y,?Nakagawa?H,?Kurosawa?M,?et?al.?Anal?Biochem,?1998,?265?:?42）通過乙硫醇和氯化氫氣體對多糖進行硫醇解，再通過硅烷化試劑對單糖進行衍生。Pitthard等（Pitthard?V,?Finch?P.?Chromatographia,?2001,?53?:?317）在此基礎上改進，通過乙硫醇—三氟乙酸和六甲基二硅氮烷—三甲基硅烷體系對單糖和糖醛酸進行衍生，成功利用GC-MS分析了植物膠中的單糖和糖醛酸；同時也研究了單糖和糖醛酸的乙硫醇-乙酸酯化衍生物，但是認為糖醛酸不能用該方法衍生。?

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供一種制備葡萄糖醛酸縮硫醇-乙酸酯衍生物方法、萄糖醛酸縮硫醇-乙酸酯衍生物，以及氣相色譜-質譜聯用同時分析中性糖和糖醛酸的方法。?

???一種葡萄糖醛酸縮硫醇-乙酸酯衍生物，其分子結構式?

。

所述的葡萄糖醛酸縮硫醇-乙酸酯衍生物的制備方法，取8?g/mL的葡萄糖醛酸0.5?mL于水解管中，55?℃水浴加熱，氮氣吹干；然后加入乙硫醇2?mL和三氟乙酸1?mL，25?℃水浴磁力攪拌25?分鐘，55?℃水浴加熱，氮氣吹干；然后加入醋酐2?mL和吡啶2mL，55℃水浴，磁力攪拌5?小時，得到葡萄糖醛酸縮硫醇-乙酸酯衍生物。?

所述葡萄糖醛酸縮硫醇-乙酸酯衍生物的制備方法的應用，用于氣相色譜-質譜聯用同時分析中性糖和糖醛酸。?

所述氣相色譜-質譜聯用同時分析中性糖和糖醛酸的方法，取8?g/mL的巖藻糖、葡萄糖、木糖、半乳糖及葡萄糖醛酸各0.5?mL于同一水解管中混合，55?℃水浴加熱，氮氣吹干；然后加入2?mL乙硫醇和1?mL三氟乙酸，25?℃水浴磁力攪拌25?分鐘，55?℃水浴加熱，氮氣吹干；然后加入醋酐2?mL和吡啶2mL，55℃水浴，磁力攪拌5?小時，不經過濃縮，直接進入氣相色譜-質譜聯用分析得到巖藻糖、葡萄糖、木糖、半乳糖及葡萄糖醛酸的含量。?

所述的巖藻糖、葡萄糖、半乳糖及葡萄糖醛酸來源于Enterobacter?cloacae?Z0206細菌分泌的多糖水解產物。?

本發明的有益效果?

本發明得到了葡萄糖醛酸縮硫醇-乙酸酯衍生物；對糖醛酸含量的測定避免了使用對水分十分敏感的硅醚化試劑，因為對糖的硅醚化反應而言，樣品的干燥和反應體系無水環境不易控制，少量的水分就可使其失去硅醚化反應能力，因此對反應體系的環境要求很高，易產生實驗誤差性，而本發明恰恰彌補這一缺陷，能夠有效提高樣品檢測的可操作性和準確性；通過驗證分析，巖藻糖、葡萄糖和半乳糖的含量與糖醇乙酸酯化吻合，而糖醛酸含量也與傳統的糖醛酸咔唑法測定結果接近，能夠同時檢測中性糖和酸性糖，不僅高效測定樣品中各糖分的含量，而且省時省力，避免樣品的耗損，以及儀器重復使用。

附圖說明

下面結合附圖和具體實施方式對本發明進一步詳細的說明；?

圖1?Z0206細菌純化多糖EPS的高效凝膠滲透色譜圖；

圖2木糖為內標的單糖和葡萄糖醛酸標樣的縮硫醇乙酸酯化衍生物總離子流色譜圖；

圖3縮硫醇乙酸酯化葡萄糖醛酸衍生物質譜圖；

圖4縮硫醇乙酸酯化葡萄糖醛酸質譜裂解途徑；

圖5單糖乙酸酯化衍生物氣相色譜圖。

??具體實施方式?