[發(fā)明專利]一種生物堿類化合物及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210437136.X
• 申請(qǐng)日: 2012-11-05
• 公開（公告）號(hào): CN102942516A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何山;嚴(yán)小軍;丁立建
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧波大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D209/14
• 分類號(hào): C07D209/14;A61K31/4045;A61P35/00;C12P17/10;C12R1/01
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33226
• 代理人: 程曉明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種生物堿類化合物，尤其是涉及一種生物堿類化合物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

吲哚生物堿類化合物是生物堿類化合物的最大的家族，可治療呼吸、消化、心血管、中樞神經(jīng)和腫瘤等廣泛疾病。目前主要從植物中提取獲得，很少?gòu)募?xì)菌中發(fā)現(xiàn)。本發(fā)明人研究得知，海洋細(xì)菌Pseudoalteromonas?rubra.QD1-2（保藏于國(guó)家海洋局第三海洋研究所，保藏編號(hào)為：CGMCC?No.1k00044）液體發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)乙酸乙酯提取，提取物有很好的細(xì)胞增殖抑制活性，于是對(duì)其活性成分進(jìn)行了研究。目前尚未見該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及細(xì)胞增殖抑制活性的報(bào)道，因此市場(chǎng)上也尚未見有與此相關(guān)的藥物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖，具有抗腫瘤活性的生物堿類化合物及其制備方法和用途。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種生物堿類化合物，該生物堿類化合物的結(jié)構(gòu)式如下所示，

一種生物堿類化合物的制備方法，具體包括如下步驟：

（1）發(fā)酵生產(chǎn)

將假交替單胞菌（Pseudoal?terommonaas?rubra.QD1-2）保藏號(hào)為CGMCCNo.6555劃線接種到Zobell2216E固體斜面培養(yǎng)基上，于30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1天后；將斜面培養(yǎng)獲得的菌落接種1個(gè)菌落到400ml?EM培養(yǎng)基中，于30℃，轉(zhuǎn)速150rpm的條件下?lián)u床培養(yǎng)7天，獲得發(fā)酵產(chǎn)物；

（2）浸膏的獲得

將發(fā)酵產(chǎn)物用離心機(jī)離心去除菌體，獲得發(fā)酵液，取發(fā)酵液加入等體積的乙酸乙酯充分萃取1次，收集萃取液，再取萃余液加入等體積的乙酸乙酯重復(fù)萃取1次，收集萃取液，再將獲得的萃余液加入等體積的乙酸乙酯重復(fù)萃取1次，合并三次萃取所得萃取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將乙酸乙酯去除，獲得粗浸膏；

（3）化合物的分離精制

將粗浸膏用甲醇溶解后，用半制備反相高效液相色譜進(jìn)行分離純化得到生物堿類化合物，其結(jié)構(gòu)如下所示：

所述的Zobell2216E培養(yǎng)基的配制方法如下：蛋白胨5.0g,酵母膏1.0g,磷酸鐵0.01g,瓊脂16.0g，陳海水1000ml，調(diào)pH至7.6-7.8。

所述的EM培養(yǎng)基的配制方法如下：蛋白胨1g，酵母粉2g，葡萄糖0.1g，天然海水1000ml。

所述的半制備反相高效液相色譜的洗脫液為甲醇與水按體積55:45的比例混合而成。

一種生物堿類化合物的應(yīng)用，所述的生物堿類化合物具有抑制腫瘤作用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明一種生物堿類化合物及其制備方法和用途，通過微生物發(fā)酵培養(yǎng)來獲取吲哚生物堿類化合物的發(fā)酵物，然后將發(fā)酵產(chǎn)物用乙酸乙酯提取，得粗浸膏，將該提取物經(jīng)反相半制備高效液相色譜分離純化得到，該生物堿類化合物具有抑制細(xì)胞活性，抗腫瘤作用。

上述假交替單胞菌（Pseudoalteromonaas?rubra.QD1-2），該菌為QD1-2菌株，保藏編號(hào)為CGMCC?No.6555，于2012年09月11日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。

實(shí)施例1

一種生物堿類化合物結(jié)構(gòu)式如Ⅰ所示。

實(shí)施例2

如I式所示的生物堿類化合物的制備方法，具體包括如下步驟：

（1）發(fā)酵生產(chǎn)

將假交替單胞菌（Pseudoalteromonas?rubra.QD1-2）保藏號(hào)為CGMCCNo.6555劃線接種到Zobell2216E固體斜面培養(yǎng)基上，于30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1天后；將斜面培養(yǎng)獲得的菌落接種1個(gè)菌落到400ml?EM培養(yǎng)基中，于30℃，轉(zhuǎn)速150rpm的條件下?lián)u床培養(yǎng)7天，獲得發(fā)酵產(chǎn)物；

（2）浸膏的獲得

將發(fā)酵產(chǎn)物用離心機(jī)離心去除菌體，獲得發(fā)酵液，取發(fā)酵液加入等體積的乙酸乙酯充分萃取1次，收集萃取液，再取萃余液加入等體積的乙酸乙酯重復(fù)萃取1次，收集萃取液，再將獲得的萃余液加入等體積的乙酸乙酯重復(fù)萃取1次，合并三次萃取所得萃取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將乙酸乙酯去除，獲得粗浸膏；

（3）化合物的分離精制

將粗浸膏用甲醇溶解后，用半制備反相高效液相色譜進(jìn)行分離純化得到生物堿類化合物，其結(jié)構(gòu)如下所示：