[發明專利]一種產耐表面活性劑脂肪酶的菌株及耐表面活性劑脂肪酶的制備方法

有效

• 申請號: 201210436966.0
• 申請日: 2012-11-05
• 公開（公告）號: CN103805526B
• 公開（公告）日: 2018-01-12
• 發明（設計）人: 徐正軍;周美鳳;許駿;柴丹
• 申請（專利權）人: 豐益（上海）生物技術研發中心有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/20;C12P7/64;C11D3/386;C12R1/01
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司11285
• 代理人: 張廣育,寧濤

1.一種金黃桿菌菌株，其保藏編號為CGMCC No.6261。

2.一種制備脂肪酶的方法，其特征在于，包括以下步驟：在適合生產脂肪酶的條件下培養權利要求1所述的菌株，使該菌株產生脂肪酶，從培養物中分離出脂肪酶。

3.權利要求2所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)在適合生產脂肪酶的液體發酵培養基中培養權利要求1所述的菌株；

(2)收集步驟(1)所得的發酵液，過濾濃縮，獲得濃縮液；

(3)對步驟(2)所得的濃縮液進行鹽析，收集鹽析沉淀物；

(4)將步驟(3)所得的鹽析沉淀物溶解后，進行層析純化；

(5)收集步驟(4)所得的層析洗脫物中的脂肪酶。

4.權利要求3所述的方法，其中步驟(1)為：

在25-40℃、120-250rpm下將權利要求1所述的菌株于適合生產脂肪酶的液體發酵培養基中培養8-72小時。

5.權利要求3所述的方法，其中步驟(2)為：

收集步驟(1)所得的發酵液，通過離心或微濾的方法除去菌體，再將濾液用超濾膜進行超濾濃縮，獲得濃縮液。

6.權利要求3所述的方法，其中步驟(3)為：

對步驟(2)所得的濃縮液進行硫酸銨鹽析，收集20-70％飽和度的鹽析沉淀物。

7.權利要求3所述的方法，其中步驟(4)為：

將步驟(3)所得的鹽析沉淀物用起始緩沖液溶解后，使用疏水層析柱進行層析純化，層析過程中先用洗脫緩沖液進行洗脫，再用蒸餾水洗脫，最后用10-70％v/v的乙醇水溶液進行洗脫。

8.權利要求3所述的方法，其中步驟(5)為：

收集步驟(4)所得的層析洗脫物中的脂肪酶活性峰，并使用置換緩沖液將獲得的脂肪酶緩沖液體系置換為20-50mM、pH7.0-8.5的Tris·HCl緩沖液，從而得到脂肪酶。

9.權利要求5所述的方法，其中在步驟(2)中，收集發酵液后用濾紙進行過濾，收集的清液經過0.1-0.5μm的微孔濾膜過濾，再用5-30kDa的超濾膜進行超濾濃縮。

10.權利要求7所述的方法，其中步驟(4)中所述的起始緩沖液為含有0.1-2M(NH₄)₂SO₄的20-100mM濃度、pH6.0-8.5的Tris-HCl緩沖液；所述的洗脫緩沖液為20-100mM濃度、pH6.0-8.5的Tris-HCl緩沖液。

11.權利要求8所述的方法，其中步驟(5)中所述的置換緩沖液為20mM-100mM濃度的pH6.0-8.5的Tris·HCl緩沖液。

12.權利要求8所述的方法，其中步驟(5)中所述的置換通過凝膠層析、透析或超濾的方式進行。

13.權利要求1所述的菌株用于生產脂肪酶的用途。

14.權利要求1所述的菌株用于水解脂肪的用途。

15.權利要求1所述的菌株用于油脂加工、食品、醫藥、環境保護、有機合成和日用化學品工業中需要脂肪酶的應用中的用途。

16.權利要求14或15所述的用途，其特征在于，使用所述菌株進行發酵生產后的發酵液用于所述用途。

17.權利要求16所述的用途，其特征在于，所述發酵液為在適合生產脂肪酶的液體發酵培養基中培養所述菌株獲得的發酵液。

18.權利要求16所述的用途，其特征在于，在存在表面活性劑和/或氧化劑的條件下使用所述發酵液。

19.權利要求18所述的用途，其特征在于，所述表面活性劑為陰離子表面活性劑和/或非離子表面活性劑。

20.權利要求19所述的用途，其中所述陰離子表面活性劑為十二烷基硫酸鈉。

21.權利要求19所述的用途，其中所述非離子表面活性劑為Triton X-100和AEO-9。

22.權利要求21所述的用途，其中所述氧化劑為雙氧水。

23.使用權利要求1所述的菌株進行發酵生產后的發酵液。