[發明專利]用于鑒定或輔助鑒定小麥春化基因VRN-1的PCR體系

無效

• 申請號: 201210436962.2
• 申請日: 2012-11-05
• 公開（公告）號: CN102912026A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 穆培源;張曉科;相吉山;張影全;桑偉;徐紅軍;韓新年;聶迎彬;崔鳳娟;鄒波
• 申請（專利權）人: 新疆農墾科學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;A01G1/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.用于鑒定或輔助鑒定待測小麥春化基因的多重PCR引物對組，所述小麥春化基因為VRN-A1基因、VRN-B1基因和VRN-D1基因，其特征在于：所述多重PCR引物對組由特異于所述VRN-A1基因的兩個引物對、特異于所述VRN-B1基因的一個引物對，以及特異于所述VRN-D1基因的一個引物對組成；

所述特異于VRN-A1基因的兩個引物對分別為序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA組成的引物對1，以及序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA組成的引物對2；

所述特異于VRN-B1基因的一個引物對為序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA組成的引物對3；

所述特異于VRN-D1基因的一個引物對為序列表中序列7和序列8所示的兩條單鏈DNA組成的引物對4。

2.根據權利要求1所述的引物對組，其特征在于：所述引物對組中，所述序列1、所述序列2、所述序列3、所述序列4、所述序列5、所述序列6、所述序列7和所述序列8共八條單鏈DNA在PCR反應體系中的摩爾比為3.2~4：3.2~4：2~2.5：2~2.5：3~3.5：3~3.5：2.5~3：2.5~3。

3.根據權利要求2所述的引物對組，其特征在于：所述引物對組中，所述序列1、所述序列2、所述序列3、所述序列4、所述序列5、所述序列6、所述序列7和所述序列8共八條單鏈DNA在PCR反應體系中的摩爾比為3.2：3.2：2：2：3：3：2.5：2.5。

4.含有權利要求1-3中任一所述引物對組的試劑盒。

5.權利要求1-3中任一所述引物對組的制備方法，其特征在于：所述制備方法包括將權利要求1-3中任一所述引物對組中各引物對的所述兩條單鏈DNA分別單獨包裝的步驟。

6.權利要求4所述PCR試劑盒的制備方法，包括如下步驟：將權利要求1-3中任一所述的引物對組中各引物對的所述兩條單鏈DNA分別單獨包裝后，與下述物質中的至少一種包裝在同一試劑盒內：PCR反應緩沖液、DNA聚合酶和4種dNTP。

7.鑒定或輔助鑒定待測小麥含有Vrn-A1a、Vrn-A1b、Vrn-A1c和vrn-A1這四種基因中哪一種、含有Vrn-B1和vrn-B1這兩種基因中哪一種，以及含有Vrn-D1和vrn-D1這兩種基因中哪一種的方法，包括如下步驟：

（1）以待測小麥的基因組DNA為模板，用權利要求1-3中任一所述引物對組進行PCR反應，所述PCR反應的退火溫度為61℃；

（2）檢測步驟（1）得到的PCR產物的大小，按照如下方法根據PCR產物確定所述待測小麥含有Vrn-A1a、Vrn-A1b、Vrn-A1c和vrn-A1這四種基因中哪一種、含有Vrn-B1和vrn-B1這兩種基因中哪一種，以及含有Vrn-D1和vrn-D1這兩種基因中哪一種：

若所述PCR產物中同時含有715bp和624bp的兩個DNA片段，則所述待測小麥含有或候選含有Vrn-A1a基因；若所述PCR產物中含有473bp的DNA片段，則所述待測小麥含有或候選含有Vrn-A1b基因；若所述PCR產物中含有493bp的DNA片段、同時不含有1068bp的DNA片段，則所述待測小麥含有或候選含有Vrn-A1c基因；若所述PCR產物中同時含有493bp和1068bp的兩個DNA片段，則所述待測小麥含有或候選含有vrn-A1基因；

若所述PCR產物中含有1149bp的DNA片段，則所述待測小麥含有或候選含有vrn-B1基因；若所述PCR產物中不含有1149bp的DNA片段，則所述待測小麥含有或候選含有Vrn-B1基因；

若所述PCR產物中含有1671bp的DNA片段，則所述待測小麥含有或候選含有Vrn-D1基因；若所述PCR產物中不含有1671bp的DNA片段，則所述待測小麥含有或候選含有vrn-D1基因。

8.一種培育冬性小麥品種的方法，包括采用通過權利要求7的方法鑒定得到的如下a）-c）的小麥作為親本進行育種的步驟：

a）含有或候選含有vrn-A1基因；

b）含有或候選含有vrn-B1基因；

c）含有或候選含有vrn-D1基因。