[發明專利]大觀霉素膠體金檢測卡

無效

• 申請號: 201210436230.3
• 申請日: 2012-11-06
• 公開（公告）號: CN103808939A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 杜道林;張勇
• 申請（專利權）人: 江蘇維賽科技生物發展有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

屬于食品安全檢測領域，具體涉及食品中有害殘留物的檢測方法，特別是大觀霉素試紙檢測方法。

背景技術

大觀霉素（英文名spectinomycine?），又稱奇觀霉素、奈雷素、壯觀霉素、放線壯觀霉素、奇放線菌素。屬于氨基苷類抗生素，對革蘭陰性菌（如綠膿桿菌，變形桿菌）和金黃色葡萄球菌有效，特別是對淋球菌活性很強。大觀霉素為一種氨基環醇類化合物，由鏈霉菌streptomyces?spectabilis分離而得，主要存在于動物性產品的組織和肝臟內，可損害第八對腦神經，有腎臟毒性及對神經肌肉的阻斷作用。

歐盟2002年頒布了關于大觀霉素在組織中的最大殘留限量（殘留標示物均為原形）。所有食品動物的肌肉、脂肪、肝、腎中大觀霉素的最大殘留限量分別為300?μg/kg、500?μg/kg、1000?μg/kg和1500?μg/kg我國農業部于2003年也頒布了關于大觀霉素在組織中的最大殘留限量，大觀霉素在牛/羊/豬/雞的肌肉、脂肪、肝、腎中最大殘留限量分別為500?μg/kg、2000?μg/kg、2000?μg/kg和5000?μg/kg。因此加強對大觀霉素殘留檢測技術的研究，是有效控制動物組織中藥物殘留的關鍵措施，也是建立和完善藥物殘留監控體系的任務之一。

目前，現有的技術對于大觀霉素的檢測主要依賴于色譜和質譜技術，也有酶聯免疫檢測試劑盒，但是還沒有大觀霉素的檢測卡出現。

發明內容

本發明目的在于提供快速檢測出動物源食品中大觀霉素的殘留。

本發明的技術方案是大觀霉素的檢測卡及其檢測樣品的處理方法。大觀霉素的檢測卡是在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼內設置檢測條，檢測卡外殼表面有檢測窗孔和加樣孔，其特征在于測試條是由支承背板上粘貼四種原件組成：支承背板中部粘貼硝酸纖維素膜，支承背板一端上粘貼吸水紙，另一端粘貼樣品墊，吸水紙內端與硝酸纖維素膜搭接，樣品墊與硝酸纖維素膜之間則有一段金標墊，由金標墊將樣品墊與硝酸纖維素膜連接在一起。金標墊中是含有第二種屬動物蛋白和大觀霉素抗體的混合物，硝酸纖維素膜上橫向有2條間隔開的顯色印記帶，一條是含大觀霉素蛋白質偶聯物的檢測帶，另一條是第二種屬動物蛋白的IgG（常用的為抗兔抗體或抗鼠抗體）；測試條置入檢測卡外殼內，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。

樣品處理方法是：稱取試樣2±0.05?g?于50?mL的離心管中，加入10?mL超純水，在1800?r/min條件下用高速組織粉碎機打碎（約1?min），取粘稠液加50%三氯乙酸2?mL和二氯甲烷10?mL，在回旋式振蕩器上高速振搖30?min。然后在4℃?5000?rpm條件下離心30?min，取上清10?mL，加二氯甲烷2?mL，在回旋加速器上振蕩混合20?min，再在4℃?12000?rpm條件下離心30?min，上清液即為藥物的抽提液。

本發明的優點是能快速檢測出肌肉、組織中含有的大觀霉素，且節省檢測成本，使用方便，檢測快速，靈敏度高，結果準確。

附圖說明

圖1是大觀霉素檢測卡外殼及檢測試紙條在外殼內的安置圖。

圖2是大觀霉素檢測卡檢測試紙條結構示意圖。

圖3是檢測試紙條硝酸纖維素膜上顯示印跡帶示意圖。

具體實施方式

1.?標記膠體金的制備

膠體金溶液的制備：先將1?g氯金酸（HAuCl₄）粉末溶于100?mL超純水配置成1%的氯金酸溶液；再取1?L超純水于特質電爐上加熱，至沸騰后加入10?mL?1%的檸檬酸三鈉水溶液，沸騰后繼續加熱，5分鐘后加10?mL?1%的氯金酸溶液，再次加熱至沸騰，等待顏色變為酒紅色后開始計時，10分鐘后停止加熱，取下后自然冷卻、定容至1?L，即為膠體金溶液；

抗體標記：確定抗體所需的0.1?mol/l?K₂CO₃的比例，取100?mL膠體金溶液，加入此比例0.1?mol/L的K₂CO₃，混勻（約5?min），再將大觀霉素和第二種屬動物蛋白分別用PBS（0.01?mo1/L，pH7.4）溶解稀釋至2?mg/mL，加入2?mL?2?mg/mL的大觀霉素抗體（或2?mL?2?mg/mL第二種屬動物蛋白），混勻（5?min），最后加入10%?BSA?2?mL，混勻（5?min）。離心三次留沉淀，此三次收集的沉淀即為金標大觀霉素抗體；