[發(fā)明專利]一種富含花粉蛋白質(zhì)的提取方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210435949.5
• 申請(qǐng)日: 2012-11-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103540634A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉進(jìn)祖;吳忠高;劉進(jìn);呂傳軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京市蜂業(yè)公司
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06
• 代理公司: 北京安博達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11271
• 代理人: 徐國(guó)文

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及一種蜂產(chǎn)品的制備方法，具體講涉及一種花粉蛋白質(zhì)的提取方法。

【背景技術(shù)】

蜂花粉是蜜蜂從植物花朵上采集花粉的過(guò)程中加入一些花蜜和唾液，以使花粉黏集成團(tuán)，即形成花粉團(tuán)。蜂花粉是自然界撫育人類的優(yōu)質(zhì)營(yíng)養(yǎng)源，它含有200余種營(yíng)養(yǎng)成分，包含了自然界全部營(yíng)養(yǎng)素，是最完美的營(yíng)養(yǎng)保健食品之一。

蜂花粉含有多種營(yíng)養(yǎng)成分，一般蜂花粉中含水分30~40%、蛋白質(zhì)11~35%、總糖含量20~39%（其中葡萄糖14.4%、果糖19.4%）、脂質(zhì)1~20%，還含有多種維生素和生長(zhǎng)因子。

其中花粉蛋白質(zhì)中的必需氨基酸精氨酸（4.6～6.0）、纈氨酸（5.8～11.2）、組氨酸（2.5～3.2）、異亮氨酸（5.1～7.0）、亮氨酸（7.1～9.0）、賴氨酸（6.3～7.7）、蛋氨酸（1.7～2.4）、蘇氨酸（4.1～5.3）、色氨酸（1.2～1.6）、苯丙氨酸（4.1～5.9），各氨基酸的含量分布與FDA-WHO所推薦的優(yōu)質(zhì)食品中氨基酸模式非常接近。蜂花粉含有特別的肽和蛋白質(zhì)，具有許多功能性蛋白，這些因子是中藥的營(yíng)養(yǎng)和保健因子。近100種酶和輔酶對(duì)人體生理機(jī)能具有特殊功能。相關(guān)研究表明，蛋白質(zhì)是花粉的主要成分之一，其不僅存在于花粉的表面，還大量存在于花粉胞液內(nèi)。然而，天然花粉具有堅(jiān)韌的細(xì)胞壁，其結(jié)構(gòu)中的孢粉素具有耐酸、耐堿、耐溫、耐壓以及對(duì)胃酸和其他消化系統(tǒng)酶非常穩(wěn)定的理化特性，阻礙了人體對(duì)花粉蛋白質(zhì)的吸收利用。對(duì)花粉進(jìn)行破壁，是提高其蛋白質(zhì)提取利用的有效手段。目前，通用的破壁花粉的方法有仿蜂糧發(fā)酵法，有機(jī)溶劑提取法，酸堿破壁法和酶法破壁法。

專利號(hào)為200710097715.3，發(fā)明名稱為一種富含花粉活性肽的抗氧化酶解物中公開(kāi)了以油菜蜂花粉為原料，將蜂花粉破壁、脫脂后，加8～25倍量去離子水，調(diào)整pH值為6～10，加熱到30～60℃，加入蛋白酶進(jìn)行酶解反應(yīng)，溫度控制在20～80℃，保溫?cái)嚢?0～180min，在酶解反應(yīng)進(jìn)行到蛋白含量較少時(shí)，迅速加熱升溫到80℃以上，保溫?cái)嚢?0～30min，終止酶解反應(yīng)，然后迅速降至室溫，進(jìn)行固液分離，得到清液，用截留相對(duì)分子量>10000D的超濾膜進(jìn)行分離，取濾過(guò)液用截留相對(duì)分子量<400D的超濾膜或納濾膜進(jìn)行分離，取濾余液干燥。該方法雖然使用酶進(jìn)行水解破壁，但由于未對(duì)花粉蛋白的破壁和提取進(jìn)行專門的研究，且只研究了固定大小范圍內(nèi)的多肽片段的活性，因而花粉蛋白的提取不完全，提取得率低。其他現(xiàn)有技術(shù)也存在同樣的技術(shù)問(wèn)題。因此，如何提高花粉蛋白的提取得率并控制提取成本是目前花粉高效利用的重要方面。

【發(fā)明內(nèi)容】

為了解決蜂花粉直接服用具有難消化及相關(guān)產(chǎn)品蛋白質(zhì)含量少、工藝復(fù)雜等的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種花粉蛋白質(zhì)的提取方法，使花粉蛋白質(zhì)的提取得率更高，且生產(chǎn)成本有所降低。本發(fā)明利用蛋白酶水解花粉蛋白可以破壁花粉并增加花粉蛋白的溶解性，從而使胞內(nèi)外的花粉蛋白都釋放并溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲小Ｋ龇椒ò▽⒒ǚ鄯鬯檫^(guò)篩后，加入水及蛋白酶進(jìn)行酶解，分離得到上清液和沉淀，用水或極性有機(jī)溶劑進(jìn)一步溶解沉淀后分離得上清液，合并上清液即得，使得花粉蛋白質(zhì)提取率在74%以上。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案:

一種富含花粉蛋白質(zhì)的提取方法，包括：

（1）原料為經(jīng)干燥、過(guò)60～100目的蜂花粉，加入花粉重量3～7倍的水及按2000～5000U/g干花粉的量加入堿性蛋白酶，于pH7.0～7.8、52～58°C下水解2～3h，90~100℃下攪拌10~30min；

（2）分離的沉淀用其重量3～7倍的水和極性有機(jī)溶劑分別提取，分離，合并上清液。

本發(fā)明的一種富含花粉蛋白質(zhì)的提取方法，其中，（1）中花粉過(guò)60目篩，加水量為花粉重量的7倍，pH值為7.8。

本發(fā)明的一種富含花粉蛋白質(zhì)的提取方法，其中，堿性蛋白酶的添加量為3500U/g干花粉，于58℃下水解3h。

本發(fā)明的一種富含花粉蛋白質(zhì)的提取方法，其中，（1）中花粉過(guò)80目篩，加水量為花粉重量的6.5倍，pH值為7.6，55℃下水解2.5h，在90℃下攪拌20min。

本發(fā)明的一種富含花粉蛋白質(zhì)的提取方法，其中，沉淀用水提取1～2次，極性有機(jī)溶劑提取的次數(shù)為0～2次，總提取次數(shù)為1～4次。

本發(fā)明的一種富含花粉蛋白質(zhì)的提取方法，其中，極性有機(jī)溶劑包括乙醇。

本發(fā)明的一種富含花粉蛋白質(zhì)的提取方法，其中，極性有機(jī)溶劑為乙醇，加入量為沉淀重量的5倍，提取2次。