[發明專利]大觀霉素快速時間分辨熒光免疫層析定量檢測試紙條

無效

• 申請號: 201210434957.8
• 申請日: 2012-11-05
• 公開（公告）號: CN103792357A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 杜道林;張勇
• 申請（專利權）人: 江蘇維賽科技生物發展有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于食品安全檢測領域，具體涉及食品中有害殘留物的檢測方法，特別是大觀霉素定量檢測的時間分辨熒光免疫層析試紙條及其制備方法和應用。?

背景技術

大觀霉素（英文名Spectinomycin）是一種氨基環醇類化合物，由鏈霉Streptomyces?

spectabilis分離而得，主要存在于動物性產品的組織和肝臟內，可損害第八對腦神經，有腎臟毒性及對神經肌肉的阻斷作用。

歐盟2002年頒布了關于大觀霉素在組織中的最大殘留限量（殘留標示物均為原形）。所有食品動物的肌肉、脂肪、肝、腎中大觀霉素的最大殘留限量分別為300?μg/kg、500?μg/kg、1000?μg/kg和1500?μg/kg我國農業部于2003年也頒布了關于大觀霉素在組織中的最大殘留限量，大觀霉素在牛/羊/豬/雞的肌肉、脂肪、肝、腎中最大殘留限量分別為500?μg/kg、2000?μg/kg、2000?μg/kg和5000?μg/kg。因此加強對大觀霉素殘留檢測技術的研究，是有效控制動物組織中藥物殘留的關鍵措施，也是建立和完善藥物殘留監控體系的任務之一。?

目前的免疫層析（lateral?flow?immunoassay，LFIA）快速檢測試紙條多以膠體金、彩色乳膠微球或者熒光素作為標記物。基于膠體金標記技術開發的快速檢測產品，存在定性或者半定量，批間差異較大等問題；彩色乳膠微球雖然批間差有所改進，但靈敏度依然較低，也只能定性或半定量；基于熒光素標記技術的免疫層析靈敏度有了較大提高，也能進行定量檢測，但是由于樣本中含有較高的熒光本底信號，且stock位移較小，會對檢測產生較大的影響。?

時間分辨熒光（Time-resolved?Fluorescence，TRF）是一種非同位素熒光標記物，與普通熒光相比，具有stock位移大，熒光壽命長等特點，可以有效的避免樣品中的本底熒光，以及激發光等雜散光的影響，因此相比普通熒光具有更高的靈敏度和抗干擾能力。?

本發明利用Fusion5替代傳統的樣品墊、濾血膜、結合墊，將原有的四層甚至五層膜系統簡化，開發出只需要三層膜結構的快速定量免疫層析檢測試紙，不僅使生產工藝得到了簡化，而且有效的降低了產品的批內差和批間差，提高了檢測靈敏度，極具實用價值。?

發明內容

本發明的目的是為了提供新型的、能快速定量檢測大觀霉素的時間分辨熒光免疫層析檢測試紙條及其制備方法和應用。?

本發明一方面公開了大觀霉素時間分辨熒光免疫層析定量檢測試紙條，該試紙條包括Fusion5膜、硝酸纖維素膜以及吸水紙三部分。硝酸纖維素膜位于中間，Fusion5膜與吸水紙分別搭接于硝酸纖維素膜左右兩端。其中，Fusion5膜上設有加樣區和微球區，微球區上載有時間分辨熒光微球；硝酸纖維素膜上設有檢測線（T線）和質控線（C線），T線接上包被大觀霉素抗原，C線包被抗兔抗體。?

本發明的優點是能快速檢測出肌肉、組織中大觀霉素的含量。?

所述大觀霉素時間分辨熒光微球，包括檢測微球和質控微球，檢測微球為表面包被有大觀霉素單抗的熒光微球，質控微球為表面包被有兔抗標記蛋白的熒光微球。?

所述熒光微球中填充了斕系元素化合物；較優的，該斕系元索鰲合物為銪鰲合物；最優的，該銪鰲合物可為Eu（TTA）₃/TOPO或Eu（TTA）₃/Phen?。?

所述蛋白可以是牛血清Y?-?球蛋白（BGG）或小牛血清白蛋白（BSA）。?

所述時間分辨熒光微球粒徑范圍為100?-?1000?nm。?

所述硝酸纖維素膜上，T線上包被的抗體為大觀霉素單抗，C線上包被的抗兔抗體。?

所述大觀霉素時間分辨熒光免疫定量檢測試紙條底部設有塑料底板。?

本發明第二方面公開了大觀霉素時間分辨熒光免疫層析定量檢測試紙條的制備方法，包括以下步驟：?

(1)?質控微球制備：

????①?用生物素標記蛋白；

????②?采用上述標記蛋白包被醛基修飾的熒光微球；

????(2)?檢測微球制備：采用大觀霉素的單抗包被醛基修飾的熒光微球；

(3)?空白大卡粘貼：將硝酸纖維素膜粘貼在塑料底板中間，Fusion5膜與吸水紙分別搭接于硝酸纖維素膜左右兩端；