[發(fā)明專利]一種檢測朊病毒的試劑盒及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210431979.9
• 申請日: 2012-11-01
• 公開（公告）號(hào): CN102879577A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王傳華;劉蕓
• 申請（專利權(quán)）人: 山東龍美生物醫(yī)學(xué)科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577
• 代理公司: 濟(jì)南金迪知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37219
• 代理人: 王緒銀

1.一種檢測朊病毒的試劑盒，其特征在于，包括：

包被有捕獲抗體的ELISA板，

所述的捕獲抗體為具有與SEQ?ID?NO.1所示氨基酸序列結(jié)合反應(yīng)的捕獲抗體；

與朊病毒結(jié)合的藕聯(lián)生物素標(biāo)記的檢測抗體，

所述與朊病毒結(jié)合的藕聯(lián)生物素標(biāo)記的檢測抗體是具有與SEQ?ID?NO.2所示氨基酸序列結(jié)合反應(yīng)的檢測抗體；

以及抗體稀釋液、樣品稀釋液、洗滌液、streptavidin-HRP、底物液和終止液。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的捕獲抗體的抗體亞型為IgG2a，由兩條相同的捕獲抗體重鏈和兩條相同的捕獲抗體輕鏈構(gòu)成，所述的捕獲抗體重鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示，捕獲抗體輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ?ID?NO.4所示。

3.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的與朊病毒結(jié)合的藕聯(lián)生物素標(biāo)記的檢測抗體亞型為IgG1，由兩條相同的檢測抗體重鏈和兩條相同的檢測抗體輕鏈構(gòu)成，所述的檢測抗體重鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ?ID?NO.5所示，檢測抗體輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ?ID?NO.6所示。

4.權(quán)利要求1所述檢測朊病毒的試劑盒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）包被有捕獲抗體的ELISA板的制備方法，步驟如下：

取ELISA孔板，每個(gè)孔用100μl的5μg/ml捕獲抗體溶液包被，4℃過夜后取出，置于室溫下，靜置30-60min，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液清洗3-5次，每次5min；然后，用封閉液封閉，37℃溫育2h后，棄去孔內(nèi)液體，用清洗液清洗5min，置于4℃?zhèn)溆茫频冒挥胁东@抗體的ELISA板；

（2）與朊病毒結(jié)合的藕聯(lián)生物素標(biāo)記的檢測抗體的制備方法，步驟如下：

向1ml濃度為10mg/ml的捕獲抗體溶液中，加入2mg生物素，混勻，室溫下靜置30min，制得與朊病毒結(jié)合的藕聯(lián)生物素標(biāo)記的檢測抗體；

（3）按現(xiàn)有技術(shù)配制抗體稀釋液、樣品稀釋液、洗滌液、streptavidin-HRP溶液、底物液和終止液，然后包裝后，即得檢測朊病毒的試劑盒。

5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）和步驟（2）中的捕獲抗體溶液采用如下方法制備：

A.制備抗原：從感染朊病毒的倉鼠的腦組織中提純朊病毒蛋白分子；

B.免疫：將純化的朊病毒蛋白分子與弗氏佐劑混合，皮下免疫注射Balb/c小鼠；

C.克隆雜交瘤細(xì)胞制備：2月后取小鼠脾臟，收集單個(gè)脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，制備雜交瘤細(xì)胞，篩選可分泌抗PrPSc抗體的雜交瘤細(xì)胞，擴(kuò)增培養(yǎng)，即為單克隆雜交瘤細(xì)胞；

D.制備單克隆抗體：將單克隆雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔，造成小鼠產(chǎn)生腹水，腹水中含有大量單克隆抗體溶液，即捕獲抗體溶液。

6.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中的封閉液采用如下方法配制：取2ml兔血清溶于100ml的樣品稀釋液中，即得。