[發(fā)明專利]梔子苷元的制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210430574.3
• 申請(qǐng)日: 2012-10-22
• 公開（公告）號(hào): CN103773821A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蕭偉;王振中;丁崗;畢宇安;鈕小松;孟兆青;程寧波;徐海娟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): C12P17/06
• 分類號(hào): C12P17/06
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及一種梔子苷元的制備方法。

背景技術(shù)

中藥梔子為茜草科植物梔子Gardenia?jasminoides?Ellis的干燥成熟果實(shí)，具有護(hù)肝、利膽、降壓、鎮(zhèn)靜、止血、消腫等作用，在中醫(yī)臨床常用于治療黃疸型肝炎、扭挫傷、高血壓、糖尿病等癥。梔子果實(shí)主要含有梔子苷(Geniposide)、梔子苷酸(Geniposidic?acid)、異梔子苷(Gardenoside)、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷(Genipin-1-β-D-gentiobioside)等環(huán)烯醚萜苷類成分，亦含有黃酮類梔子素(Gardenin)，三萜類化合物藏紅花素(Crocin)、藏紅花酸(Crocetin)及α-藏紅花甙元(α-Crocetin)?，F(xiàn)代藥理研究表明，梔子苷在消化道內(nèi)給藥時(shí)，因水解而生成梔子苷元，梔子苷元在顯著增加膽汁流量時(shí)，能使膽汁中膽汁酸濃度下降，但對(duì)膽汁酸的排泄量基本無(wú)影響。梔子苷元對(duì)胃機(jī)能產(chǎn)生抗膽堿能性的抑制作用，梔子苷元十二指腸給藥，對(duì)幽門結(jié)扎大鼠呈胃液分泌抑制，胃液總酸度減小，胃液pH值上升。

梔子苷元是梔子苷經(jīng)水解后的產(chǎn)物，是一種優(yōu)良的天然生物交聯(lián)劑，可以與蛋白質(zhì)、膠原、明膠和殼聚糖等交聯(lián)制作生物材料，如人造骨骼、傷口包扎材料等。也可用于治療肝臟疾病、降壓、通便等。以色列一家醫(yī)療中心的研究結(jié)果表明，梔子苷元可以緩解II型糖尿病的癥狀。

在現(xiàn)有技術(shù)中，在申請(qǐng)?zhí)枮?01010105535.7的中國(guó)發(fā)明專利中，公開了以海藻酸鈉為載體、戊二醛為交聯(lián)劑對(duì)糖苷水解酶進(jìn)行固定化，固定化糖苷水解酶酶在醋酸-酸酸鈉緩沖液和乙酸乙酯組成的雙相系統(tǒng)中催化水解梔子苷，使梔子苷轉(zhuǎn)化成為梔子苷元。論文《β-葡萄糖苷酶水解梔子苷的工藝研究》公開了采用β-葡萄糖苷酶水解的方法將梔子苷轉(zhuǎn)化為苷元。

現(xiàn)有公開的梔子苷元制備工藝存在步驟復(fù)雜，且梔子苷元易與蛋白質(zhì)(酶)發(fā)生聚合反應(yīng)，梔子苷元得率較低，不能滿足工業(yè)化生產(chǎn)的需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種用梔子苷制備高得率梔子苷元的方法。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明是通過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn)的：

一種梔子苷元的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟：

(1)酶解料液的配制：以水為溶劑，加入梔子苷，復(fù)合纖維素酶，無(wú)水乙酸鈉，冰醋酸，攪拌混勻，得梔子苷酶解料液；

(2)酶解反應(yīng)：將梔子苷酶解料液攪拌，15～70℃，反應(yīng)12～36h，10000～20000r/min離心10～45min，棄沉淀，留上清液，上清液揮干溶劑，得到梔子苷元。

該方法所述的酶解梔子苷步驟中采用的梔子苷原料為梔子苷含量為40％以上純度，采用的酶優(yōu)選為160～200萬(wàn)活力單位的復(fù)合纖維素酶，所述的水用量?jī)?yōu)選為每1kg梔子苷用水20～30L；復(fù)合纖維素酶與梔子苷質(zhì)量比優(yōu)選為0.5～1.5∶0.5～1.5，無(wú)水乙酸鈉與梔子苷質(zhì)量比優(yōu)選為0.3～0.5∶0.6～1.2，冰醋酸與梔子苷質(zhì)量比優(yōu)選為0.1～0.4∶0.8～1.2。所述的酶解反應(yīng)條件優(yōu)選為在25～60℃下反應(yīng)15～30h。

以下采用部分實(shí)驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步解釋：

一、溫度對(duì)酶解的影響

配制四組酶解液，梔子苷濃度為40mg/mL(原料梔子苷含量為60％粉末)，酶苷質(zhì)量比為1∶1，乙酸-乙酸鈉緩沖鹽pH4.5，將四組酶解液分別以靜置冷藏(0-4℃)、靜置常溫(15-25℃)、水浴攪拌(50℃)、水浴攪拌(70℃)四種方式進(jìn)行處置。第一組樣品每隔12h取樣檢測(cè)，第二、三、四組樣品每隔4h取樣檢測(cè)分析，所得結(jié)果見表1。

表1

結(jié)果表明，15～70℃均有較好的酶解效果，其中溫度為25℃時(shí)酶解效果最好。

二、時(shí)間對(duì)酶解的影響

25℃下，配制酶解液，梔子苷濃度為40mg/mL(原料梔子苷含量為60％粉末)，酶苷質(zhì)量比為1∶1，乙酸-乙酸鈉緩沖鹽pH4.5，開攪拌器，酶解36小時(shí)，每隔4小時(shí)取樣，HPLC檢測(cè)梔子苷與苷元含量變化。結(jié)果見附圖1。

由附圖1可知，梔子苷元在反應(yīng)的24h內(nèi)有明顯的增長(zhǎng)，在15-30h內(nèi)效果較好，在20-24h左右維持高點(diǎn)穩(wěn)定。

三、不同酶對(duì)酶解效果的影響

按照表2所示分別配制三組反應(yīng)液。

表2三組反應(yīng)液成分配制比例表