[發(fā)明專利]Paa蛋白及由其制備的抗體與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210428554.2
• 申請日: 2012-10-31
• 公開（公告）號: CN102940875A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發(fā)明（設計）人: 王慧;李濤;王琴;韓燃
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: A61K38/16
• 分類號: A61K38/16;A61K39/00;A61K39/395;G01N33/68;G01N33/569;C07K16/12;A61P31/04
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術領域，尤其涉及Paa蛋白及由其制備的抗體與應用。

背景技術

腸出血性大腸桿菌（enterohemorrhage?E.coli，EHEC）是毒力最強、致病性也最強的大腸桿菌，受到廣泛的關注。EHEC感染可使人患腹瀉、出血性結腸炎（HC），還可引發(fā)溶血性尿毒綜合癥（HUS）及血栓性血小板減少紫癜（TTP）等嚴重并發(fā)癥，嚴重者可導致死亡，致死率達5%～10%。2011年4月，德國暴發(fā)了腸出血性大腸桿菌O104：H4感染和溶血性尿毒綜合征（HUS）疫情，蔓延到歐洲和北美洲的16個國家。同年四、五月間，日本富山地區(qū)暴發(fā)了新感染疫情，血清型為O111，某些病例在引起HUS之后，出現(xiàn)了神經(jīng)癥狀，并發(fā)彌散型血管內凝血和腦病。在EHEC中，致病性強、危害大的還有O157：H7。自1975年被首次分離、1982年被確認為致病菌以來的20多年中，世界各地包括中國都有不同規(guī)模的暴發(fā)流行。1999年在我國江蘇、安徽兩省有過大規(guī)模暴發(fā)流行，患者超過2萬例，死亡177例。EHEC感染已經(jīng)成為歐美國家兒童腎衰的首位病因，對人們的健康構成了巨大威脅。另外，作為一種重要的人獸共患病病原體，EHEC病原菌可長期駐留于牛、羊、豬、雞等家畜家禽的腸道中，造成動物的腹瀉，并污染畜禽的肉奶蛋制品以及水源和農(nóng)作物等，給農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)造成巨大的損失。因此，EHEC感染已經(jīng)成為全球性的公共衛(wèi)生問題。

目前，臨床針對EHEC感染主要采取對癥治療，因為抗生素治療具有加劇病情的危險性而被謹慎使用，沒有可以使用的疫苗和特異治療藥物。疫苗被認為是應對EHEC暴發(fā)流行和散發(fā)感染最簡單，經(jīng)濟，快捷的手段。如果能發(fā)現(xiàn)和獲得核心抗原或優(yōu)勢保護性抗原，就可以進一步發(fā)展為新型疫苗。

黏附定植是細菌感染損傷的關鍵環(huán)節(jié)，細菌黏附于宿主上皮細胞導致A/E（Attaching?and?effacing，A/E）病變。Tir、Intimin、Map、EspF、EspG、EspH、SepZ、EspB都是已被公認的由LEE編碼的效應分子，都參與EHEC的A/E損傷。但研究人員發(fā)現(xiàn)仍然存在另一些非LEE編碼的效應分子。

Paa（porcine?attaching?and?effacing?associated）為753bp基因編碼的27.6kDa蛋白，序列分析發(fā)現(xiàn)paa基因編碼蛋白的氨基酸序列在O157：H7EDL933和Saikai中完全一致。染色體定位技術發(fā)現(xiàn)包含paa基因的區(qū)域位于染色體上，在yciD和yciE之間。Theresa等發(fā)現(xiàn)paa基因的EHEC缺失突變株會降低對hela細胞的黏附，同時也會降低某些細胞表面蛋白的分泌，這些蛋白有些對EHEC的分泌系統(tǒng)是不可或缺的，而這些分泌系統(tǒng)是EHEC黏附細胞的重要保障，所以Paa與EHEC的黏附有著某些關系。目前，多國科學家針對Paa蛋白的黏附功能和分子機制正展開研究，但迄今為止，還沒有從免疫學角度上證實Paa分子在細菌感染檢測、免疫防護方面的作用和功能。

發(fā)明內容

本發(fā)明的一個目的是提供Paa蛋白的新用途。

本發(fā)明提供的Paa蛋白在制備具有如下1）-3）中至少一種功能的產(chǎn)品中的應用：

1）預防和/或治療由病原菌EHEC感染或引發(fā)的疾病；

2）降低病原菌EHEC對腸道感染損傷；

3）降低病原菌EHEC在腸道定值力；

所述Paa蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列2。

上述應用中，所述產(chǎn)品為疫苗或藥物。

上述應用中，所述腸道為人或動物腸道，在本發(fā)明的實施例中動物腸道為小鼠腸道；所述病原菌EHEC為EHEC?O157：H7。

Paa蛋白作為靶標或檢測標志物在開發(fā)或制備診斷感染病原菌EHEC的產(chǎn)品中的應用也是本發(fā)明保護的范圍；在上述應用中，所述Paa蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列2。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種產(chǎn)品。

本發(fā)明提供的產(chǎn)品，其活性成分為Paa蛋白；

所述產(chǎn)品為具有如下1）-3）中至少一種功能的產(chǎn)品：

1）預防和/或治療由病原菌EHEC引發(fā)疾病；

2）降低病原菌EHEC對腸道感染損傷；

3）降低病原菌EHEC在腸道定值力。

4）檢測病原菌EHEC的感染。

由Paa蛋白作為抗原制備的抗體也是本發(fā)明保護的范圍；所述Paa蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列2。

上述抗體為多克隆抗體或單克隆抗體。