[發明專利]一種口蹄疫病毒抗體的ELISA試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201210427310.2
• 申請日: 2012-10-31
• 公開（公告）號: CN102998460A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 李其昌;陳善真;李中圣;劉小琴;羅均;趙焱;陳克宏;王貴平
• 申請（專利權）人: 廣東現代農業集團研究院有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 湯喜友

1.一種口蹄疫病毒抗體的ELISA試劑盒，其特征在于：包括非蛋白多聚體定向偶聯口蹄疫病毒反應原性多肽抗原包被液包被的酶標板；陽性血清和陰性血清各1管，其中陽性血清為FMDV標準陽性血清稀釋液，陰性血清為FMDV標準陰性血清稀釋液；用辣根過氧化物酶標記的羊抗豬IgG的稀釋液1瓶；抗體稀釋液1瓶；底物顯色液1瓶；終止液1瓶。

2.根據權利要求1所述的口蹄疫病毒抗體的ELISA試劑盒，其特征在于：所述非蛋白多聚體定向偶聯口蹄疫病毒反應原性多肽抗原包被液是非蛋白多聚體定向偶聯口蹄疫病毒反應原性多肽抗原用包被液按照0.01μg/mL-?5μg/mL濃度稀釋，偶聯口蹄疫病毒反應原性多肽抗原是通過以下方法制備得到的：

1）選取反應原性多肽溶解，得到反應原性多肽溶液；

2）取非蛋白多聚體溶解，得到非蛋白多聚體溶液；

3）在反應原性多肽溶液或非蛋白多聚體溶液中加入偶聯劑，混合均勻；

4）將反應原性多肽溶液與非蛋白多聚體溶液混合均勻，攪拌反應，使反應原性多肽偶聯到非蛋白多聚體上；

5）用透析袋去除未參與結合的偶聯劑及游離多肽，純化，凍干，得到多聚體偶聯反應原性多肽；

其中口蹄疫病毒反應原性多肽為SEQ?ID?NO:1～SEQ?ID?NO:18系列多肽中的一種或幾種。

3.根據權利要求1所述的口蹄疫病毒抗體的ELISA試劑盒，其特征在于：所述偶聯口蹄疫病毒反應原性多肽抗原包被液包被的酶標板是用非蛋白多聚體定向偶聯口蹄疫病毒反應原性多肽抗原包被液包被的至少8孔的酶標板，每孔100μL，4℃過夜包被，包被濃度為0.01μg/mL-?5μg/mL，用PBST洗滌液250μl/孔洗滌2-4次后拍干，用封閉液150μl/孔，37℃封閉1h，洗滌液PBST?250μl/孔洗滌3次后拍干，放入真空袋中，加入干燥劑，抽真空，4℃保存；所述包被液為1.59g?Na₂CO₃，2.93g?NaHCO₃溶于800mL雙蒸水中，調節pH值至9.6，并定容至1000mL。

4.根據權利要求1所述的口蹄疫病毒抗體的ELISA試劑盒，其特征在于：所述辣根過氧化物酶標記羊抗豬IgG的稀釋液是用HRP保護液按照辣根過氧化物酶標記羊抗豬IgG與HRP保護液體積比為1﹕2000-10000的比例稀釋，酶標二抗每瓶量為12mL；所述HRP保護液為0.1%BSA1.0g，0.25%EDTA2.5g，加PBS至?1000mL。

5.根據權利要求1所述的口蹄疫病毒抗體的ELISA試劑盒，其特征在于：所述FMDV標準陽性血清稀釋液是用抗體稀釋液按照體積比為1:16-64的比例將FMDV標準陽性血清稀釋，每管量為1mL?；FMDV標準陰性血清稀釋液用抗體稀釋液按照體積比為1:16-64的比例將FMDV標準陰性血清稀釋，每管量為1mL。

6.根據權利要求1所述的口蹄疫病毒抗體的ELISA試劑盒，其特征在于：所述抗體稀釋液為0.1%BSA，1.0g?BSA加入PBS至?1000mL；每瓶量為12mL。

7.根據權利要求1所述的口蹄疫病毒抗體的ELISA檢測試劑盒，其特征在于：所述底物顯色液為50mg?TMB?，10mL?DMSO，9.8g檸檬酸和1.2mL?30%?H₂O₂?加蒸餾水定容至1000mL；每管量為12mL。

8.根據權利要求1所述的口蹄疫病毒抗體的ELISA試劑盒，其特征在于：所述終止液包括雙蒸水178.3mL和98%的濃硫酸21.7mL，每管量為6mL。

9.根據權利要求1所述的口蹄疫病毒抗體的ELISA試劑盒，其特征在于：其還包括1瓶洗滌液，所述洗滌液為0.2g?KH₂PO₄，2.9g?Na₂HPO₄·12H₂O，8.0g?NaCl，0.2g?KCl，0.5mL?Tween-20（0.05%?V/V），加雙蒸水定容至100mL，pH值為7.4。

10.一種口蹄疫病毒抗體的ELISA試劑盒的制備方法，其特征在于：包括以下步驟

1）用非蛋白多聚體定向偶聯口蹄疫病毒反應原性多肽抗原包被液包被酶標板；

2）抗體稀釋液配制；

3）底物液顯色液配制；

4）終止液配制；

5）陰陽性血清稀釋；

6）酶標二抗配制；

7）試劑盒的組裝：將非蛋白多聚體定向偶聯口蹄疫病毒反應原性多肽抗原包被的酶標板1塊、陰陽性血清各1管、抗體稀釋液1瓶、酶標二抗1瓶、底物顯色液1瓶、終止液1瓶、操作說明書一份組裝成ELISA檢測試劑盒。