[發(fā)明專(zhuān)利]一種通用型水稻工程保持系的培育方法及其在水稻普通核不育系繁殖中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210426939.5
• 申請(qǐng)日: 2012-10-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102870670A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 段美娟;袁定陽(yáng);余東;譚炎寧;孫志忠;孫學(xué)武;劉瑞芬;袁光杰;袁貴龍;趙炳然;陳良碧;袁隆平
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 湖南雜交水稻研究中心
• 主分類(lèi)號(hào): A01H1/02
• 分類(lèi)號(hào): A01H1/02;C12N15/82;C12Q1/68
• 代理公司: 湖南兆弘專(zhuān)利事務(wù)所 43008
• 代理人: 趙洪;楊斌

1.一種通用型水稻工程保持系的培育方法，包括以下步驟：

（1）準(zhǔn)備基因型為ss的水稻普通核不育系，s表示控制水稻普通核不育系不育性狀的不育基因；

（2）構(gòu)建顏色標(biāo)記基因C的雙元表達(dá)載體；

（3）采用現(xiàn)有的轉(zhuǎn)基因方法將所述雙元表達(dá)載體轉(zhuǎn)入基因型為SS的上述水稻普通核不育系的來(lái)源親本或育性正常的品種中，篩選得到帶有顏色標(biāo)記基因C的T₀代轉(zhuǎn)基因株系；再將T₀代轉(zhuǎn)基因株系通過(guò)不斷的自交繁殖獲得帶有單拷貝顏色標(biāo)記基因的純合株系，其基因型為SSCC；

（4）分析步驟（3）所獲得的每個(gè)純合株系中顏色標(biāo)記基因C在水稻基因組中的插入位點(diǎn)，并根據(jù)顏色標(biāo)記基因C在水稻基因組的插入位置，篩選出一系列單拷貝的純合株系組庫(kù)，使純合株系組庫(kù)中的水稻基因組每隔0~2cM就有一個(gè)顏色標(biāo)記基因C，該純合株系組庫(kù)即構(gòu)成了一個(gè)工程保持系候選庫(kù)；

（5）將步驟（1）中的水稻普通核不育系與步驟（4）中工程保持系候選庫(kù)中的每個(gè)純合株系進(jìn)行雜交，獲得F₁雜合種子，F(xiàn)₁雜合種子自交繁殖一代獲得多種基因型的F₂種子，然后通過(guò)色選工藝先剔除F₂種子中帶有顏色標(biāo)記基因C的種子，將剩余不帶顏色標(biāo)記基因C的各組F₂種子分別進(jìn)行培育，獲得對(duì)應(yīng)的各組F₂株系，調(diào)查前述各組F₂株系中的不育株數(shù)，篩選出不育株數(shù)占比≥98%的F₂株系組，并將該F₂株系組來(lái)源的F₁雜合種子作為所述水稻普通核不育系的工程保持系。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培育方法，其特征在于：所述水稻普通核不育系的不育性狀是由單基因控制的隱性核不育性狀，所述可育基因S對(duì)不育基因s為顯性，且不育性狀不受外界環(huán)境條件影響。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的培育方法，其特征在于：所述步驟（2）中，所述雙元表達(dá)載體具體為pCAMBIA1300、pCAMBIA1301、pCAMBIA1390、pCAMBIA3301或pBI121。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的培育方法，其特征在于：所述雙元表達(dá)載體為pCAMBIA1300或pCAMBIA1390。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的培育方法，其特征在于：所述步驟（2）中，所述的顏色標(biāo)記基因?yàn)榧t色熒光標(biāo)記基因DsRed、紅色熒光標(biāo)記基因RFP、綠色熒光蛋白基因GFP、綠色熒光蛋白基因EGFP或藍(lán)色熒光蛋白基因EBFP。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的培育方法，其特征在于：所述的顏色標(biāo)記基因?yàn)榧t色熒光蛋白基因DsRed或綠色熒光蛋白基因EGFP。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的培育方法，其特征在于：所述不育基因s為msp1、pair1、pair2、zep1、mel1、pss1、tdr、udt1、gamyb4、ptc1、api5、wda1、cyp704B2、dpw、mads3、osc6、rip1、csa或aid1，所述可育基因S為對(duì)應(yīng)的水稻野生型基因。

8.一種如權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)所述培育方法得到的通用型水稻工程保持系在該水稻普通核不育系繁殖中的應(yīng)用，其特征在于：所述工程保持系為帶有顏色標(biāo)記基因C且基因型為s^cS^C的雜合種子，所述工程保持系中顏色標(biāo)記基因C與可育基因S緊密連鎖，在進(jìn)行繁殖應(yīng)用時(shí)，先將所述工程保持系與基因型為ss的所述水稻普通核不育系進(jìn)行雜交，在雜交后代中同時(shí)獲得工程保持系種子和水稻普通核不育系種子，再通過(guò)色選機(jī)將所述工程保持系種子分選出來(lái)，剩下的種子即為基因型為ss的水稻普通核不育系種子。