[發明專利]一種干酪乳桿菌菌影及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201210424842.0
• 申請日: 2012-10-30
• 公開（公告）號: CN103013897A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 喬薪瑗;李一經;唐麗杰;葛俊偉;蘭宇
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/34;C12N15/74;A61K47/46;C12R1/245
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

1.一種干酪乳桿菌菌影的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）將干酪乳桿菌噬菌體穿孔素基因克隆到干酪乳桿菌表達載體中，得到用于轉化干酪乳桿菌的重組表達載體；

（2）將步驟（1）得到的重組表達載體轉化干酪乳桿菌，得到重組干酪乳桿菌；

（3）對步驟（2）得到的重組干酪乳桿菌進行培養，誘導噬菌體穿孔素蛋白的表達，獲得所述的干酪乳桿菌菌影。

2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于所述的干酪乳桿菌表達載體為乳酸菌表達載體pPG612.1。

3.按照權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的干酪乳桿菌為干酪乳桿菌L.casei?393。

4.按照權利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于所述的噬菌體穿孔素基因的序列如SEQ?ID?NO.1所示。

5.按照權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于步驟（3）中所述的培養是挑取重組干酪乳桿菌pPG612-hocb/L.casei393接種于含有10μg/mL氯霉素的5mLMRS液體培養基中，37℃靜置、厭氧培養12-24小時，取培養菌液按體積比1：10-20比例接種于含有10μg/mL氯霉素的MRS擴大培養基中，培養5-10小時，取出一定體積的菌液，離心收集菌體沉淀，將收集的菌體沉淀接種于相同體積的含有10μg/mL氯霉素的含2％（w/w）木糖，且不含葡萄糖的MRS液體培養基中，37℃誘導裂解基因表達，使細菌打孔，誘導時間為40-90h。。

6.按照權利要求5所述的方法，其特征在于步驟（3）中所述的培養是挑取重組干酪乳桿菌pPG612-hocb/L.casei393接種于含有10μg/mL氯霉素的5mL?MRS液體培養基中，37℃靜置、厭氧培養12小時，取培養菌液按體積比1：20比例接種于含有10μg/mL氯霉素的MRS擴大培養基中，培養7-8小時，取出50ml的菌液，離心收集菌體沉淀，將收集的菌體沉淀接種于50ml的含有10μg/mL氯霉素的含2％（w/w）木糖，且不含葡萄糖的MRS液體培養基中，37℃誘導裂解基因表達，使細菌打孔，誘導時間為88小時。

7.按照權利要求1-6任一項所述的制備方法制備得到的干酪乳桿菌菌影。

8.權利要求7所述的干酪乳桿菌菌影在制備用于轉載生物大分子的載體中的應用，所述的生物大分子包括核酸、蛋白質。