[發明專利]一種羰基還原酶、基因及其在不對稱還原前手性羰基化合物中的應用

有效

• 申請號: 201210423006.0
• 申請日: 2012-10-30
• 公開（公告）號: CN102876734A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 許建和;許國超;郁惠蕾;潘江
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12P7/22
• 分類號: C12P7/22;C12P13/00;C12P17/12;C12P17/00;C12P7/62;C12N9/04;C12N15/53;C12R1/72;C12R1/645
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 鐘華;沈利

1.羰基還原酶作為催化劑在不對稱還原前手性羰基化合物制備手性醇中的應用，其特征在于，所述羰基還原酶是如下（a）或（b）的羰基還原酶：

（a）其氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?NO:2所示的羰基還原酶；

（b）在(a)中的氨基酸序列經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且具有羰基還原酶活性的由(a)衍生的蛋白質。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，其中（b）所述羰基還原酶的氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?NO:4所示。

3.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的應用為：在緩沖液中，在葡萄糖脫氫酶和葡萄糖的存在下，在所述羰基還原酶的催化下，前手性羰基化合物進行不對稱還原反應，形成光學活性手性醇。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述羰基還原酶在所述的不對稱還原反應中的添加形式為該羰基還原酶的粗酶液，所述緩沖液中還包括NADP⁺，所述NADP⁺的含量為0.1～0.5mmol/L。

5.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述羰基還原酶在所述的不對稱還原反應中的添加形式為表達該羰基還原酶的靜息細胞。

6.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的前手性羰基化合物為如式1、式2或式3所示的化合物：

式1式2式3

其中，R₁為苯基或帶有取代基的苯基、吡啶基或噻吩基，取代基為鹵素或烷基；

R₂為烷基或鹵代烷基；

R₃為烷基或鹵代烷基；

R₄為烷基或鹵代烷基。

7.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液，該磷酸緩沖液的磷酸鹽濃度為0.05～0.1mol/L，pH值為5.5～7.0；所述不對稱還原反應的反應溫度為20～35℃；反應的時間4～12小時。

8.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述前手性羰基化合物在反應液中的濃度為1～1000mmol/L；所述羰基還原酶的用量為10U/L～120kU/L；所述葡萄糖脫氫酶的用量為10U/L～120kU/L；所述葡萄糖的用量為5～300g/L。

9.一種羰基還原酶基因，其特征在于，所述羰基還原酶基因是一種分離的核酸分子，所述核酸分子的核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO:3所示。

10.一種羰基還原酶，其特征在于，所述羰基還原酶是一種分離的蛋白質，所述蛋白質氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?NO:4所示。