[發(fā)明專利]一種人膽管癌多藥耐藥細(xì)胞建立的新方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210422772.5
• 申請(qǐng)日: 2012-10-30
• 公開（公告）號(hào): CN102911917A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉志華;秦環(huán)龍;汪建平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 劉志華
• 主分類號(hào): C12N5/09
• 分類號(hào): C12N5/09;C12R1/91
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所 31272
• 代理人: 劉懿

1.一種人膽管癌多藥耐藥細(xì)胞建立的新方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）將膽管癌細(xì)胞株放入含表皮生長(zhǎng)因子濃度為5-15μg/ml，藥物濃度為0.0005-0.002?μg/ml的培養(yǎng)液中培養(yǎng)2-4天；

2）棄去藥物培養(yǎng)液，將步驟1）處理后的膽管癌細(xì)胞株放入含表皮生長(zhǎng)因子5-15μg/ml，藥物濃度增加的培養(yǎng)液中培養(yǎng)2-4天；

3）重復(fù)步驟2），直到藥物濃度為0.25-0.3?μg/ml；

4）棄去藥物培養(yǎng)液，將步驟3）處理后的管癌細(xì)胞株放入含表皮生長(zhǎng)因子5-15μg/ml，藥物濃度降低的培養(yǎng)液中培養(yǎng)2-4天；

5）棄去藥物培養(yǎng)液，將步驟4）處理后的管癌細(xì)胞株放入含表皮生長(zhǎng)因子5-15μg/ml，藥物濃度增加的培養(yǎng)液中培養(yǎng)2-4天；

6）重復(fù)步驟5），直到藥物濃度比步驟3）的藥物濃度高0.1-1μg/ml；

7）重復(fù)步驟4）、步驟5）和步驟6），每次重復(fù)后藥物濃度均比上一次重復(fù)后的藥物濃度高0.1-1?μg/ml，直到藥物濃度為0.8-1.5?μg/ml為止。

2.根據(jù)權(quán)利1所述的一種人膽管癌多藥耐藥細(xì)胞建立的新方法，其特征在于，增加藥物濃度每次增加0.004-0.25?μg/ml。

3.根據(jù)權(quán)利1所述的一種人膽管癌多藥耐藥細(xì)胞建立的新方法，其特征在于，降低藥物濃度每次降低0.1-0.25?μg/ml。

4.根據(jù)權(quán)利1所述的一種人膽管癌多藥耐藥細(xì)胞建立的新方法，其特征在于，膽管癌細(xì)胞株在培養(yǎng)液中每次培養(yǎng)3天。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人膽管癌多藥耐藥細(xì)胞建立的新方法，其特征在于，所述表皮生長(zhǎng)因子的濃度為10?μg/ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人膽管癌多藥耐藥細(xì)胞建立的新方法，其特征在于，所述藥物為氮芥、環(huán)磷酰胺、博萊霉素、長(zhǎng)春新堿、平陽霉素、優(yōu)福啶、哺氟啶或多柔比星中的任意一種或幾種。

7.一種如權(quán)利要求1所述方法建立的多藥耐藥膽管癌細(xì)胞。