[發(fā)明專利]KRAS基因突變檢測試劑盒及檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210422269.X
• 申請日: 2012-10-30
• 公開（公告）號: CN102888466A
• 公開（公告）日: 2013-01-23
• 發(fā)明（設計）人: 蔡從利;張喆;周鵬飛
• 申請（專利權）人: 武漢友芝友生物制藥有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 深圳中一專利商標事務所 44237
• 代理人: 張全文

1.一種KRAS基因突變檢測試劑盒，該試劑盒包括PCR緩沖液，酶溶液，7對特異性引物，1對質控引物，特異性探針，鎖核酸探針，內標系統(tǒng)和參比染料，其中，所述7對特異性引物序列分別為SEQ?ID?NO:1與SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3與SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5與SEQ?ID?NO:6、SEQ?ID?NO:7與SEQ?ID?NO:8、SEQ?ID?NO:9與SEQ?ID?NO:10、SEQ?ID?NO:11與SEQ?ID?NO:12、SEQ?ID?NO:13與SEQ?ID?NO:14，所述1對質控引物為SEQ?ID?NO:15和SEQ?ID?NO:16。

2.如權利要求1所述的KRAS基因突變檢測試劑盒，其特征在于，所述酶溶液含有Taq酶和UNG酶。

3.如權利要求1所述的KRAS基因突變檢測試劑盒，其特征在于，所述鎖核酸探針結構為:

5’-T+AG+T+TGG+AGC+TGGTGGC-3’-PO4。

4.如權利要求1所述的KRAS基因突變檢測試劑盒，其特征在于，所述特異性探針序列為SEQ?ID?NO:17，且所述特異性探針5’端修飾有FAM或VIC，3’端修飾有NFQ-MGB。

5.如權利要求1所述的KRAS基因突變檢測試劑盒，其特征在于，所述內標系統(tǒng)包含內標引物、內標探針和內標模板，且所述內標引物序列為SEQ?ID?NO:19和SEQ?ID?NO:20，所述內標探針序列為SEQ?ID?NO:21，所述內標模板序列為SEQ?ID?NO:22。

6.如權利要求5所述的KRAS基因突變檢測試劑盒，其特征在于，所述內標探針5’端修飾有VIC或FAM，3’端修飾有TAMRA。

7.如權利要求1所述的KRAS基因突變檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒還含有陽性對照液和空白對照液，所述陽性對照液含有7種質粒DNA混合液，所述7種質粒DNA分別含有7種不同的KRAS突變基因，所述空白對照液為Tris-HCl緩沖液。

8.一種KRAS基因突變檢測方法，包括以下步驟：

（1）制備如權利要求1-7中任一項所述的KRAS基因突變檢測試劑盒；

（2）取1只質控管和7只突變檢測管，分別向其中加入步驟（1）中的PCR緩沖液、酶溶液、參比染料、特異性探針和內標系統(tǒng)，并向所述1只質控管中加入步驟（1）中的質控引物，向所述7只突變檢測管中分別加入步驟（1）中的7對特異性引物，且所述7只突變檢測管中均加入鎖核酸探針；

（3）提取待測樣品DNA，分別加入至所述1只質控管和7只突變檢測管中，進行PCR反應。

9.如權利要求8所述的KRAS基因突變檢測方法，其特征在于，所述步驟（3）的PCR反應體系中各組分終濃度及含量如下：

10.如權利要求8所述的KRAS基因突變檢測方法，其特征在于，所述步驟（3）中PCR反應條件為：

37℃10分鐘，95℃5分鐘，

40個循環(huán)：95℃15秒，60℃60秒。