[發明專利]沙蔥葉片黃酮類物質的提取方法

無效

• 申請號: 201210421109.3
• 申請日: 2012-10-24
• 公開（公告）號: CN103071021A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 楊忠仁;龐杰;張鳳蘭;郝麗珍;黃修梅
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: A61K36/8962
• 分類號: A61K36/8962;A61P39/06;G01N21/31;A61K127/00
• 代理公司: 呼和浩特北方科力專利代理有限公司 15100
• 代理人: 王社

技術領域

本發明涉及一種黃酮類物質的提取方法，特別指沙蔥葉片黃酮類物質的提取方法。?

背景技術

植物是生物活性化合物的巨大天然寶庫，其產生的次生代謝產物超過400000種。其中黃酮類化合物是一種在植物界中廣泛分布的酚類化合物。大量研究表明，黃酮類化合物具有清除自由基、抗氧化、抗突變、抗腫瘤、抗菌、抗病毒和調節免疫、防治血管硬化、降血糖等功能。現在對黃酮提取的研究主要集中在于蕓香科、唇形科、豆科、傘形科、銀杏科和菊科中。盡管很早就有蔥屬植物含黃酮成分的報道，但具體研究很少。目前僅從其中幾種植物中分出少量的黃酮苷。張沐新等研究了分蘗蔥頭總黃酮的提取技術，結果顯示分蘗蔥頭含黃酮類物質0.4261g/g。張澤英研究了大蒜黃酮提取工藝，大蒜含黃酮類物質3.76％，說明蔥屬植物也含有較高含量的黃酮類物質。?

沙蔥(Allium?mongolicum?Regel.)別名蒙古韭，廣泛分布我國新疆東北部、青海北部、甘肅北部、寧夏北部、陜西北部、內蒙古和遼寧西部。生長在海拔800～2400m的荒漠、沙地或半干旱山坡。葉及花可食，地上部分可入蒙藥，能健胃、消食、殺蟲，主治消化不良、不思飲食、禿瘡、青腿病等，各種牲畜均喜食，為一等飼用植物。沙蔥做為一種具有藥用價值的野生蔬菜，對其粗黃酮含量和抗氧化性進行研究，進一步完善黃酮類物質提取技術和不同方法提取的黃酮類物質的檢測，為沙蔥的進一步開發利用提供理論依據是很有意義的。?

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種沙蔥葉片黃酮類物質的提?取方法，這種提取方法進行試驗條件的優化，為提取出的粗黃酮提取液進行體外模擬抗氧化能力檢測。?

本提取方法采用熱回流提取技術提取沙蔥葉片干粉黃酮，其技術簡單，可以實行工廠化生產。并對最佳提取技術參數進行優化，具體技術參數有：樣液比(1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40)；萃取提取時間(2h、2.5h、3h、3.5h、4h)；萃取的酒精濃度(20％、40％、60％、80％、100％)；萃取溫度(50℃、60℃、70℃、80℃、90℃)。抗氧化性檢測是進行黃酮粗提取液對·OH的清除作用和黃酮粗提取液清除活性氧自由基O₂·-的方法。?

本發明要解決的技術問題由如下方案來實現：沙蔥葉片黃酮類物質的提取方法，其特征是：陰干沙蔥葉片用粉碎機粉碎，過20-30目篩子，放入熱回流提取器中，每1g干粉加30～40ml的55％～65％的乙醇浸泡，水浴鍋加熱，進行熱回流提取，溫度50℃或90℃，提取3-4h，結束后在三角瓶中加1.5-3g活性炭粉末，混勻，濾紙過濾，用旋轉蒸發儀蒸干液體，即得沙蔥粗黃酮干樣。?

具體步驟如下：?

1最適萃取條件的選擇?

采用正交設計，對最佳試驗方法后進行試驗條件的選擇，對乙醇濃度、乙醇用量、時間、溫度四個實驗條件進行篩選，每種實驗條件五個梯度，見表：?

熱回流提取結束后向提取溶液中加入1.5g活性炭粉末，混勻后濾紙過濾。旋轉蒸發儀蒸干，然后用酒精定容到100ml。?

2檢測條件?

參考大蒜黃酮檢測方法，10ml提取的黃酮溶液，加入10％的NaNO2溶液1ml，搖勻后放置5min，加入10％的Al(NO₃)₃溶液1ml，搖勻后放置5min，再加入5％的NaOH溶液10ml，然后定容在25ml，在510nm下比色。以不加提取液作為空白試劑。?

3標準曲線的繪制?

準確稱取干燥至恒重的蘆丁標準品，用95％乙醇定容，配制成20mg/ml的標準應用液備用。準確吸取標準應用液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分別置于25ml比色管中，同樣按照上面的NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH的步驟顯色，15min后同樣以不加標準應用液的試管作空白試劑，在最大特征吸收波長510nm處測定各個標樣的吸光度。?

4抗氧化性研究?

提取的沙蔥葉粗黃酮用旋轉蒸發儀蒸干，用蒸餾水溶解至3μg/ml備用。?

4.1黃酮對·OH的清除作用?