[發明專利]一種嵌合病毒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210420744.X
• 申請日: 2012-10-29
• 公開（公告）號: CN103205460A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: 李玉華;吳永林;楊會強;李竹石;楊健;林華;趙宇;俞永新;董關木
• 申請（專利權）人: 成都生物制品研究所有限責任公司;中國食品藥品檢定研究院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N7/01;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

技術領域

本發明涉及一種嵌合病毒，特別涉及一種嵌合了登革病毒保護性抗原的乙腦病毒感染性克隆。

背景技術

登革熱是被WHO喻為危害最為嚴重的被忽視的熱帶和亞熱帶傳染病之一。據WHO統計，自1955年發現該病以來，WHO報告的登革病例增長了約30倍。目前，全球有近一半人口（35億）生活在登革熱的流行區域，每年發病例大約為5000萬，但是目前全球還沒有疫苗可供使用。

登革疫苗研發的關鍵難點是登革病毒按血清型分為四種，即登革1型、登革2型、登革3型、登革4型，并在流行區域交替出現。四個血清型之間雖然有交叉反應，但沒有交叉保護或交叉保護很弱，持續時間很短，僅有數月。當感染某種血清型的登革病毒后，一般僅表現癥狀較弱的臨床癥狀或無癥狀，如再被另一種血清型登革病毒感染，會出現抗體依賴的病理增強作用，表現為潛伏期短，臨床癥狀明顯加重，可能出現嚴重的出血、休克或死亡。因此必須研發能同時保護4個血清型登革病毒的四價登革疫苗。由于4個血清型登革病毒生長特性差別大、免疫應答能力各異，要維持4個型登革疫苗之間一定的免疫反應水平的平衡具有一定的技術難度。因此，迄今沒有安全有效疫苗上市。

申請號：200910085231.6，發明名稱：乙腦/登革嵌合病毒及其應用的專利申請是利用乙腦減毒疫苗株SA14-14-2為基因骨架，將登革2型病毒NGC株抗原基因prM-E替換乙腦疫苗株相應基因區域構建而成。由于該專利產品僅能在蚊子細胞C6/36上繁殖，該細胞不能用于人用疫苗的生產，且僅為乙腦/登革2型一種嵌合病毒，無法進行疫苗生產，存在很大缺陷。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種新的乙腦病毒感染性克隆，以該乙腦病毒感染性克隆為骨架的登革嵌合病毒，以及登革疫苗和新的細菌人工染色體。

本發明乙腦病毒感染性克隆，其是包含乙腦病毒減毒株SA14-14-2基因組全長cDNA的重組載體。

其中，所述重組載體是重組pACNR質粒或者重組細菌人工染色體，細菌人工染色體的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

其中，所述全長cDNA的5’端具有原核啟動子。所述啟動子為SP6。

所述全長cDNA的3’端的轉錄終止位點為限制性內切酶酶切位點。所述限制性內切酶酶切位點為XhoI或SalI。

優選地，所述感染性克隆的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2或者SEQ?ID?NO.3所示。

本發明嵌合病毒，它由前述乙腦病毒感染性克隆構建而成，其中prM-E基因為登革病毒prM-E基因。

其中，所述登革病毒是登革病毒1、2、3或4型。

其中，所述登革病毒1型為登革病毒ThD0008-81株；所述登革病毒2型為登革病毒PUO-218株；所述登革病毒3型為登革病毒PaH881-88株；所述登革病毒4型為登革病毒814669株。

其中，所述登革病毒prM-E基因的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.4~7所示。

所述嵌合病毒的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.8~11任意一項所示。

前述嵌合病毒在制備登革熱疫苗中的用途。

本發明還提供了一種登革熱疫苗，它是由前述的嵌合病毒制備而成。

本發明還提供給了一種核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的細菌人工染色體。

本發明利用乙腦減毒疫苗株SA14-14-2和本發明細菌人工染色體，成功地構建了乙腦病毒感染性克隆，并以該感染性克隆為基因骨架，成功構建了含有登革1型、登革2型、登革3型或者登革4型病毒抗原基因prM-E的乙腦/登革嵌合病毒，這些嵌合病毒能在多種人用疫苗生產用細胞上生長繁殖，并且生長特性類似，可以用于四個血清型登革疫苗的生產，免疫原性強，產生的抗體的滴度高，具有良好的應用前景。

顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。

附圖說明