[發(fā)明專利]禽白血病J亞群病毒PCR檢測(cè)用引物及檢測(cè)試劑盒

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210418180.6
• 申請(qǐng)日: 2012-10-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102943127A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱慶;蘭茜;胡耀東;尹華東;劉益平;王彥;李天杰;尹月;吳杰;蘭丹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及用于檢測(cè)禽白血病J亞群病毒的PCR檢測(cè)用引物及檢測(cè)試劑盒。?

背景技術(shù)

隨著養(yǎng)禽業(yè)規(guī)?；B(yǎng)殖的不斷深入，禽病的威脅也日益凸顯。禽白血病(Avian?Leukosis，AL）因其具有高感染率，在水平方向（雞群之間交互感染）和垂直方向（該病能遺傳給下一代）均能傳播的特性，該病能感染所有雞種，感染雞群呈漸進(jìn)性發(fā)病，持續(xù)的低死亡率，是危害養(yǎng)雞業(yè)的主要疾病之一，全球每年因?yàn)榍蓊惣膊《斐傻慕?jīng)濟(jì)損失高達(dá)數(shù)百億元。?

但至今人類對(duì)禽白血病的防治幾乎還無(wú)計(jì)可施，既沒(méi)有疫苗可以利用，也沒(méi)有有效的藥物可以治療，控制禽白血病的主要方法是通過(guò)病原檢測(cè)，淘汰陽(yáng)性雞，凈化種群。目前，國(guó)際上檢測(cè)禽白血病病毒抗原最為理想的檢測(cè)方法是ELISA法，它具有敏感性高、簡(jiǎn)便快捷、適用于大規(guī)模檢測(cè)的特點(diǎn)。1979年以來(lái)，禽白血病的ELISA診斷試劑盒在國(guó)外已實(shí)現(xiàn)商品化，尤其近年來(lái)，我國(guó)陸續(xù)培養(yǎng)建立了數(shù)家SPF雞場(chǎng)，今后還會(huì)不斷增加，對(duì)SPF雞群AL／SV-gs抗原檢查目前主要依靠進(jìn)口試劑盒，不僅價(jià)格昂貴而且不方便。因此，研制較先進(jìn)的國(guó)產(chǎn)試劑盒是我們當(dāng)前急需要解決的問(wèn)題。?

禽白血病是由禽白血病肉瘤病毒群中的病毒引起的雞多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱。以在成年雞中產(chǎn)生淋巴樣腫瘤和產(chǎn)蛋量下降為特征。禽白血病病毒的多數(shù)毒株能在11～12日齡雞胚中良好生長(zhǎng)，腹腔或其他途徑接種1～14日齡易感雛雞，可引起雞發(fā)病。臨診上有多種表現(xiàn)形式，主要是淋巴白血病。禽白血病病毒目前來(lái)講可分為A、B、C、D、E和J六個(gè)亞群。其中J亞群是90年代后在肉雞中新發(fā)現(xiàn)的，?是目前常見(jiàn)的具有致病性的病毒亞群。禽白血病病毒感染雞只后，會(huì)降低雞的生長(zhǎng)和生產(chǎn)性能，或引起雞出現(xiàn)嚴(yán)重的病理反應(yīng)，甚至死亡，該病毒除了能通過(guò)髓細(xì)胞瘤在肉雞引起較高死亡率外，還可引起雞體重質(zhì)量嚴(yán)重下降，嚴(yán)重情況下會(huì)引起雞群爆發(fā)其他并發(fā)癥，從而引起雞群的大面積死亡。另外的五種亞群(A、B、C、D、E）能檢測(cè)到病毒但是通常雞只不發(fā)病。J亞群禽白血病是由反轉(zhuǎn)錄病毒科J亞群禽白血病病毒引起的一種傳染性致骨髓細(xì)胞瘤疾病或成髓性白血病。該病自發(fā)現(xiàn)以來(lái)，以垂直和水平傳播兩種形式在世界各國(guó)肉種雞、商品肉用型雞及蛋種雞中廣泛流行，引起肉種雞死亡和消瘦，嚴(yán)重生長(zhǎng)發(fā)育不良，蛋雞發(fā)生機(jī)體免疫抑制，繁殖性能持續(xù)降低，給世界各國(guó)養(yǎng)雞業(yè)帶來(lái)了極大的危害，因此對(duì)集約化養(yǎng)殖的雞群進(jìn)行J亞群病毒感染的檢測(cè)，對(duì)養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展具有重要意義。?

高感染率的禽白血病嚴(yán)重制約著養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展，并威脅著大規(guī)模養(yǎng)殖化的推廣。因此，一種能快速、低成本、準(zhǔn)確的檢測(cè)大規(guī)模雞是否感染禽白血病病毒的方法，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展具有重要意義。?

目前對(duì)于禽白血病的檢測(cè)常采用ELISA試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，其準(zhǔn)確性較高，但有兩大缺點(diǎn)：1）價(jià)格非常昂貴，不適用于養(yǎng)殖場(chǎng)全群檢測(cè)；2）ELISA試劑只能檢測(cè)出外源性的禽白血病病毒，并且不能區(qū)別病毒各亞群。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種禽白血病的PCR檢測(cè)用引物。?

本發(fā)明的另一目的在于提供檢測(cè)禽白血病的試劑盒。?

本發(fā)明提供了一種禽白血病病毒PCR檢測(cè)用引物，其能對(duì)禽白血病病毒的env基因進(jìn)行擴(kuò)增，生成禽白血病病毒特異性擴(kuò)增片段。?

優(yōu)選地，所述引物核苷酸序列如SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示。?

本發(fā)明提供了含有上述引物的診斷試劑。?

本發(fā)明提供了含有上述引物的檢測(cè)試劑盒。?

本發(fā)明提供了上述引物在制備禽白血病J亞群病毒診斷試劑盒檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。?

本發(fā)明提供的檢測(cè)禽白血病J亞群病毒的試劑盒，其檢測(cè)步驟為：?

檢測(cè)步驟為：?

1）分別抽取10~50只禽血液，個(gè)體DNA抽提后混合得到混合DNA；?

2）將步驟1）的混合DNA應(yīng)用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，根據(jù)擴(kuò)增目的條帶判斷；若樣品擴(kuò)增條帶出現(xiàn)525bp的片段，則樣品為禽白血病J亞群病毒感染陽(yáng)性樣品；若擴(kuò)增條帶沒(méi)有525bp片段，則為陰性；所述引物序列如SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示。?