[發明專利]一種抗氧化肽的制備方法

有效

• 申請號: 201210414641.2
• 申請日: 2012-10-25
• 公開（公告）號: CN102870954A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 張慧恩;楊華;王彩霞
• 申請（專利權）人: 浙江萬里學院
• 主分類號: A23J3/34
• 分類號: A23J3/34;A23J3/04;A23J1/04
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司 33102
• 代理人: 胡志萍

技術領域

本發明涉及到食品加工領域，具體指一種抗氧化肽的制備方法。

背景技術

花蛤，學名菲律賓蛤仔(Ruditapes?philippinarum)，是簾蛤科雙殼貝類，其肉質細嫩，滋味鮮美，營養豐富，是我國傳統的養殖貝類。但是，隨著花蛤養殖產業的快速發展，產量迅速增加，已出現供過于求的趨勢。因此，如何充分高效地利用花蛤資源，開發花蛤加工利用的新途徑具有重大意義。花蛤蛋白質含量高，游離氨基酸種類豐富，是優質的蛋白源。

CN1768765A公開了一種利用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶水解牡蠣蛋白獲得抗氧化肽的方法。以上公開的這些方法都是通過酶解天然蛋白質，得到抗氧化多肽。但是，蛋白質在酶解過程中，受到許多因素的影響，酶解工藝條件嚴格，酶解反應進程難以控制，酶解產物種類及活性成分含量不穩定，難以規模化生產。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的現狀提供一種反應進程易于控制且產物活性好的抗氧化肽的制備方法。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：該抗氧化肽的制備方法，其特征在于包括下述步驟：

①將新鮮花蛤煮至殼開，去殼，將花蛤肉在35-50℃真空烘干；

②將烘干的花蛤肉粉碎，過50-100目篩，得到初級花蛤肉粉末；

③將所述的花蛤肉粉末按照1g粉末，10-20mL石油醚的比例放入，振蕩，常溫靜置1小時，過濾，將濾渣重復上述操作2-3次進行脫脂；

④將上述脫脂后的花蛤肉粉末置于50-70℃真空干燥箱中，去除石油醚，得到中級花蛤肉粉末；

⑤用蒸餾水與中級花蛤肉粉末混合，配制成質量濃度為5-30%的懸浮液；調節懸浮液的pH為4.5-9.0，加入中級花蛤肉粉末質量0.5-5.0%的Alcalase蛋白酶，于45-75℃下酶解1-3小時，然后再在95-100℃下滅酶5-10min；將得到的酶解液在3000-12000rpm下離心，得到的上清液即為花蛤蛋白水解液；

⑥對上述花蛤蛋白水解液進行超濾除去大分子，過分子量10-50KDa的超濾膜，收集透過液；

⑦將上述透過液真空濃縮至固形物含量為15-50%，加入葡萄糖，葡萄糖在濃縮后的透過液中的濃度為1.0-10%，在110-120℃下反應30-90min，得到反應產物；

⑧將上述反應產物用Sephadex?G-25凝膠層析，以純水為洗脫劑，洗脫液在420nm下檢測，收集洗脫液組分；

⑨將上述洗脫液組分真空冷凍干燥至水分含量為1-5%，即得到黃色粉末狀的抗氧化肽。

與現有技術相比，本發明所提供的抗氧化肽的制備方法使用生物酶制劑對花蛤蛋白進行水解，酶解條件相比控制水解更加簡單可控，反應條件溫和，且避免了酸水解對產品的污染，酶解產物的種類和含量更加穩定，抗氧化肽得率高，且利用真空干燥技術，在干燥過程中最大限度的保證了抗氧化肽的活性，使其抗氧化功能大大增加，制成的花蛤抗氧化肽粉，功能性強，易保存；且生產工藝簡單、易于工業化生產，也為花蛤的深加工利用開辟了新途徑。

具體實施方式

以下結合實施例對本發明作進一步詳細描述。

本實施例中抗氧化肽的制備方法包括下述步驟：

①將新鮮花蛤煮至殼開，去殼，將花蛤肉在50℃下真空烘干；

②將烘干的花蛤肉粉碎，過80目篩，得到初級花蛤肉粉末；

③將所述的花蛤肉粉末按照1g粉末，10mL石油醚的比例加入，振蕩，常溫靜置1小時，過濾，將濾渣重復上述操作3次進行脫脂；

④將上述脫脂后的花蛤肉粉末置于50℃真空干燥箱中，去除石油醚，得到中級花蛤肉粉末；

⑤用蒸餾水與中級花蛤肉粉末混合，配制成質量濃度為10%的懸浮液；調節懸浮液的pH為8.0，加入中級花蛤肉粉末質量1%的Alcalase蛋白酶，65℃下酶解3小時，然后再95℃下滅酶10min；將得到的酶解液在3000rpm離心，得到的上清液即為花蛤蛋白水解液；

⑥對上述花蛤蛋白水解液進行超濾除去大分子，過分子量10-50KDa的超濾膜，收集透過液；

⑦將上述透過液真空濃縮至固形物含量為15%，加入葡萄糖，葡萄糖在濃縮后的透過液中的濃度為6.0%，在120℃下反應60min，得到反應產物；

⑧將上述反應產物用Sephadex?G-25凝膠層析，以純水為洗脫劑，洗脫液在420nm下檢測，收集洗脫液組分。采用葡聚糖凝膠Sephadex?G-25層析，主要作用是除去雜質，收集抗氧化組分。